Penjelasan istilah dasar biologi molekular
1. cDNA jeung cccDNA: cDNA mangrupakeun DNA untaian ganda disintésis ku transcriptase sabalikna tina mRNA;cccDNA nyaéta DNA sirkular tertutup untaian ganda plasmid bébas tina kromosom.
2. Unit tilepan baku: protéin Unit struktur sekundér α-helix jeung β-lambar bisa ngabentuk blok struktural kalawan arrangements geometric husus ngaliwatan rupa polipéptida nyambungkeun.Jenis lipatan anu ditangtukeun biasana disebut struktur super sekundér.Ampir kabéh struktur térsiér bisa digambarkeun ku tipe tilepan ieu, komo tipe gabungan maranéhanana, ku kituna maranéhanana disebut ogé unit tilepan baku.
3. CAP: siklik adénosin monofosfat (cAMP) protéin reséptor CRP (cAMP reséptor protéin), kompléks kabentuk sanggeus kombinasi cAMP jeung CRP disebut activating protéin CAP (cAMP diaktipkeun protéin).
4. Sekuen Palindromic: Sekuen komplementer sabalikna tina bagean tina sempalan DNA, sering situs énzim pangwatesan.
5. micRNA: RNA interfering komplementer atawa RNA antisense, nu pelengkap runtuyan mRNA sarta bisa ngahambat tarjamahan mRNA.
6. Ribozyme: RNA kalawan aktivitas katalitik, nu muterkeun hiji peran autocatalytic dina prosés splicing RNA.
7. Motif: Aya sababaraha daérah lokal anu bentukna tilu diménsi anu sami sareng topologi dina struktur spasial molekul protéin.
8. Péptida sinyal: péptida kalawan 15-36 résidu asam amino dina N-terminus salila sintésis protéin, nu nungtun transmembrane protéin.
9. Attenuator: A runtuyan nukléotida antara wewengkon operator jeung gén struktural nu terminates transkripsi.
10. Magic Spot: Nalika baktéri tumuwuh sarta sapatemon kakurangan lengkep asam amino, baktéri bakal ngahasilkeun réspon darurat pikeun ngeureunkeun ekspresi sakabéh gén.Sinyal anu ngahasilkeun tanggap darurat ieu nyaéta guanosine tetraphosphate (ppGpp) sareng guanosine pentaphosphate (pppGpp).Peran PpGpp na pppGpp teu ngan hiji atawa sababaraha operon, tapi mangaruhan angka nu gede ngarupakeun aranjeunna, ku kituna maranéhanana disebut super-regulator atawa bintik magic.
11. Unsur promoter hulu: nujul kana runtuyan DNA anu maénkeun peran pangaturan dina aktivitas promoter, kayaning TATA di wewengkon -10, TGACA di wewengkon -35, enhancers, sarta attenuators.
12. Panyilidikan DNA: bagéan DNA anu dilabélan ku runtuyan anu dipikanyaho, anu loba dipaké pikeun ngadeteksi runtuyan anu teu dipikanyaho sarta gén sasaran layar.
13. runtuyan SD: Ieu runtuyan beungkeutan ribosom jeung mRNA, nu ngatur tarjamah.
14. Antibodi Monoklonal: Antibodi anu ngan ukur ngalawan hiji determinan antigen.
15. Cosmid: Ieu mangrupa véktor DNA exogenous diwangun sacara artifisial nu nahan wewengkon COS dina duanana tungtung fag jeung disambungkeun ka plasmid nu.
16. Saringan bintik biru-bodas: Gen LacZ (encoding β-galactosidase), énzim bisa ngaurai substrat kromogenik X-gal (5-bromo-4-chloro-3-indole-β-D-galactoside) pikeun ngahasilkeun biru, sahingga ngajadikeun galur biru.Nalika DNA eksogen diselapkeun, gén LacZ teu tiasa dikedalkeun, sareng galurna bodas, ku kituna pikeun nyaring baktéri rékombinan.Ieu disebut screening biru-bodas.
17. Cis-akting unsur: A runtuyan husus basa dina DNA nu ngatur éksprési gén.
18. Enzim Klenow: fragmen badag DNA polimérase I, iwal aktivitas 5' 3' exonuclease dikaluarkeun tina DNA polimérase I holoénzim.
19. Anchored PCR: dipaké pikeun ngagedékeun DNA dipikaresep ku runtuyan dipikawanoh dina hiji tungtung.Buntut poly-dG ditambahkeun kana hiji tungtung runtuyan kanyahoan, lajeng poly-dC jeung runtuyan dipikawanoh dipaké salaku primers pikeun amplifikasi PCR.
20. Protéin fusi: Gén protéin eukariot disambungkeun jeung gén exogenous, sarta protéin diwangun ku tarjamahan protéin gén aslina jeung protéin exogenous dinyatakeun dina waktos anu sareng.
Istilah biologi molekular séjén
1. Peta fisik DNA nyaéta urutan nu (pangwatesan endonuclease-dicerna) fragmen molekul DNA nu disusun.
2. Pecahan RNase dibagi jadi dua jenis (autokatalisis) jeung (hétérokatalisis).
3. Aya tilu faktor inisiasi dina prokariot nyaéta (IF-1), (IF-2) jeung (IF-3).
4. Protéin transmémbran merlukeun pituduh (péptida sinyal), sarta peran chaperones protéin nyaéta (ngabantosan ngalipet ranté péptida kana konformasi asli protéin).
5. Unsur-unsur panyatur umumna bisa dibagi jadi dua rupa: (unsur panyumbang inti) jeung (unsur panyumbang hulu).
6. Eusi panalungtikan biologi molekular utamana ngawengku tilu bagian: (biologi molekular struktural), (ekspresi gén jeung régulasi), jeung (téhnologi rekombinasi DNA).
7. Dua percobaan konci demonstrating yén DNA mangrupa bahan genetik nyaéta (inféksi pneumococcus mencit) jeung (inféksi T2 phage Escherichia coli).poténsial).
8. Aya dua béda utama antara hnRNA na mRNA: (hnRNA ieu spliced dina prosés ngarobah kana mRNA), (5' tungtung mRNA ditambahkeun ku cap m7pGppp, tur aya hiji polyadenylation tambahan dina 3' tungtung asam mRNA (polyA) buntut).
9. Kaunggulan tina bentuk multi-subunit protéin nyaéta (subunit mangrupa métode ekonomis pikeun utilization DNA), (bisa ngurangan dampak kasalahan acak dina sintésis protéin dina aktivitas protéin), (aktivitas bisa jadi pohara éfisién jeung gancang dibuka jeung ditutup).
10. Eusi utama mékanisme lipatan protéin tiori nukleasi kahiji ngawengku (nukleasi), (pengayaan struktural), (penataan ulang ahir).
11. Galaktosa memiliki efek ganda pada bakteri;di hiji sisi (bisa dipaké salaku sumber karbon pikeun tumuwuh sél);di sisi séjén (eta oge komponén tina témbok sél).Ku alatan éta, promotor bebas cAMP-CRP S2 diperlukeun pikeun sintésis permanén di tingkat tukang;Dina waktos anu sami, promotor S1 gumantung cAMP-CRP diperyogikeun pikeun ngatur sintésis tingkat luhur.Transkripsi dimimitian ti (S2) ku G jeung ti (S1) tanpa G.
12. Téknologi DNA rékombinan ogé katelah (kloning gén) atawa (kloning molekular).Tujuan pamungkas nyaéta (ngalihkeun informasi genetik DNA dina hiji organisme ka organisme séjén).Percobaan rekombinasi DNA has biasana ngawengku léngkah di handap ieu: (1) Ékstrak gén target (atawa gén exogenous) organisme donor, sarta énzimatik nyambungkeun kana molekul DNA sejen (vektor kloning) pikeun ngabentuk molekul DNA rekombinan anyar.② Molekul DNA rékombinan ditransferkeun kana sél panarima tur direplikasi dina sél panarima.Prosés ieu disebut transformasi.③ Saring jeung identipikasi sél panarima nu geus nyerep DNA rékombinan.④Cultivate sél ngandung DNA rékombinan dina jumlah badag pikeun ngadeteksi naha gén bantuan asing dinyatakeun.
13. Aya dua jinis réplikasi plasmid: anu dikawasa sacara ketat ku sintésis protéin sél inang disebut (plasmid kedap), sareng anu henteu dikawasa sacara ketat ku sintésis protéin sél host disebut (plasmid santai).
14. Sistem réaksi PCR kudu mibanda kaayaan di handap: a.Primer DNA (kira-kira 20 basa) kalawan runtuyan komplementer dina unggal tungtung dua untaian gén target nu bakal dipisahkeun.b.Énzim anu stabilitas termal sapertos: TagDNA polimérase.c, dNTPd, runtuyan DNA dipikaresep salaku citakan
15. Prosés réaksi dasar PCR ngawengku tilu tahap: (denaturasi), (annealing), jeung (extension).
16. Prosés dasar sato transgenik biasana ngawengku: ①Ngawanohkeun gén asing kloning kana inti endog dibuahan atawa sél stém émbrionik;②Transplantasi tina endog dibuahan inoculated atawa sél stém émbrionik kana rahim bikangna;③Ngalengkepan ngembangkeun sarta pertumbuhan émbrionik Pikeun turunan jeung gén asing;④ Paké sato ieu nu bisa ngahasilkeun protéin asing salaku stock beternak pikeun breed garis homozigot anyar.
17. Garis sél Hybridoma dihasilkeun ku hibridisasi (limpa B) sél jeung sél (myeloma), sarta saprak (sél limpa) bisa ngamangpaatkeun hypoxanthine jeung (sél tulang) nyadiakeun fungsi division sél, aranjeunna bisa tumuwuh dina medium HAT.tumuwuh.
18. Jeung deepening panalungtikan, generasi kahiji antibodi disebut (antibodi polyclonal), generasi kadua (antibodi monoclonal), jeung generasi katilu (antibodi rékayasa genetik).
19. Ayeuna, rékayasa genetik virus serangga utamana fokus kana baculovirus, nu manifested dina bubuka (gén toxin exogenous);(gén nu ngaganggu siklus hirup normal serangga);(modifikasi gén virus).
20. Faktor trans-acting protéin pakait jeung elemen umum TATA, GC, jeung CAAT dina mamalia RNA polymerase II promoter nyaéta (TFIID), (SP-1) jeung (CTF/NF1), mungguh.
dua puluh hiji.Faktor transkripsi dasar RNA polimérase Ⅱ nyaéta, TFⅡ-A, TFⅡ-B, TFII-D, TFⅡ-E, sarta runtuyan mengikatna nyaéta: (D, A, B, E).Dimana fungsi TFII-D nyaéta (ngabeungkeut kotak TATA).
duapuluh dua.Sabagéan ageung faktor transkripsi anu ngabeungkeut DNA dianggo dina bentuk dimér.Domain fungsional faktor transkripsi anu ngabeungkeut DNA ilaharna kieu (helix-turn-helix), (motif jari séng), (basic-leucine) motif seleting).
dua puluh tilu.Aya tilu jinis pangwatesan modus beulah endonuclease: (motong di sisi 5' tina sumbu simetri pikeun ngahasilkeun 5' tungtung caket), (motong di sisi 3' tina sumbu simetri pikeun ngahasilkeun 3' tungtung caket (motong dina sumbu simetri pikeun ngahasilkeun bagéan datar) ).
dua puluh opat.DNA Plasmid boga tilu konfigurasi béda: (konfigurasi SC), (konfigurasi oc), (konfigurasi L).Anu kahiji dina éléktroforésis nyaéta (konfigurasi SC).
25. Sistem éksprési gén éksogén, utamana (Escherichia coli), (Ragi), (Serangga) jeung (méja sél mamalia).
26. Métode anu biasa digunakeun pikeun sato transgenik nyaéta: (métode inféksi retroviral), (métode microinjection DNA), (métode sél stém émbrionik).
Aplikasi Biologi Molekul
1. Sebutkeun fungsi leuwih ti 5 RNA?
Transfer RNA tRNA Transfer asam amino Ribosom RNA rRNA Ribosom merupakan utusan RNA mRNA Template sintesis Protein Heterogen nuclear RNA hnRNA Prekursor mRNA dewasa RNA RNA snRNA kecil Terlibat dalam splicing hnRNA Sitoplasma kecil RNA scRNA/7SL-RNA protein Sinyal retikulum-RNA sinyal plasma/RNA sinyal RNA/7SL-RNA Sinyal plasma dan sinyal RNA sintesis RNA Ngatur ekspresi gén Ribozyme RNA RNA aktip sacara énzimatik
2. Naon bedana utama prokariot jeung eukariot?
Prokariot TTGACA --- TATAAT------Situs Inisiasi-35 -10 Enhancer Eukariot---GC ---CAAT----TATAA-5mGpp-Situs Inisiasi-110 -70 -25
3. Naon aspék utama konstruksi jieunan plasmid alam?
Plasmid alami sering gaduh cacad, janten henteu cocog pikeun dianggo salaku pembawa rékayasa genetik, sareng kedah dirobih sareng didamel: a.Tambahkeun gén pananda pilihan anu cocog, sapertos dua atanapi langkung, anu gampang dianggo pikeun seleksi, biasana gén antibiotik.b.Ningkatkeun atanapi ngirangan situs motong énzim anu cocog pikeun ngagampangkeun rékombinasi.c.Shorten panjangna, neukteuk off fragmen teu perlu, ningkatkeun efisiensi impor jeung ningkatkeun kapasitas loading.d.Ngarobah réplika, tina kedap jadi leupas, tina leuwih saeutik salinan jadi leuwih salinan.e.Tambahkeun elemen genetik husus nurutkeun sarat husus tina rékayasa genetik
4. Béré conto métode pikeun screening diferensial cDNA jaringan-spésifik?
Dua populasi sél disusun, gén udagan dinyatakeun atawa diekspresikeun pisan dina salah sahiji sél, jeung gén udagan henteu dikedalkeun atawa rendah diekspresikeun dina sél séjén, lajeng gén udagan kapanggih ku hibridisasi jeung babandingan.Contona, dina mangsa lumangsungna tur ngembangkeun tumor, sél tumor bakal nampilkeun mRNAs kalawan tingkat ekspresi béda ti sél normal.Ku alatan éta, gén nu patali tumor bisa disaring kaluar ku hibridisasi diferensial.Métode induksi ogé tiasa dianggo pikeun nyaring gén anu ekspresina diinduksi.
5. Generasi sareng saringan garis sél hibridoma?
Sél B limpa + sél myeloma, tambahkeun poliétilén glikol (PEG) pikeun ngamajukeun fusi sél, sarta sél fusi B-myeloma splenic tumuwuh dina medium HAT (ngandung hypoxanthine, aminopterin, T) terus dilegakeun nourish.Fusi sél ngandung: sél fusi limpa-limpa: teu bisa tumuwuh, sél limpa teu bisa dikultur in vitro.Sél fusi tulang-tulang: teu bisa ngamangpaatkeun hypoxanthine, tapi bisa nyintésis purin ngaliwatan jalur kadua maké folat réduktase.Aminopterin ngahambat folat réduktase sahingga teu tiasa tumuwuh.Sél fusi tulang-limpa: bisa tumuwuh dina HAT, sél limpa bisa ngamangpaatkeun hypoxanthine, sarta sél tulang nyadiakeun fungsi division sél.
6. Kumaha prinsip jeung métode nangtukeun struktur primér DNA ku métode terminasi terminal dideoxy (metode Sanger)?
Prinsipna nyaéta ngagunakeun terminator ranté nukléotida-2,,3,-dideoxynucleotide pikeun nungtungan perluasan DNA.Kusabab eta lacks 3-OH diperlukeun pikeun ngabentuk beungkeut 3/5 / phosphodiester, sakali diasupkeun kana ranté DNA, ranté DNA teu bisa salajengna diperpanjang.Nurutkeun prinsip papasangan basa, iraha wae DNA polimérase perlu dNMP pikeun ilubiung dina ranté DNA ilaharna ngalegaan, aya dua kemungkinan, hiji pikeun ilubiung dina ddNTP, nu ngakibatkeun terminasi extension ranté deoxynucleotide;nu séjén nyaéta pikeun ilubiung dina dNTP, ambéh ranté DNA masih bisa neruskeun ngalegaan nepi ka ddNTP salajengna diasupkeun.Numutkeun métode ieu, grup fragmen DNA tina panjangna béda tungtung ddNTP bisa diala.Carana nyaéta ngabagi kana opat kelompok masing-masing ddAMP, ddGMP, ddCMP, sareng ddTMP.Saatos réaksina, éléktroforésis gél polyacrylamide tiasa maca sekuen DNA numutkeun pita ngojay.
7. Naon pangaruh régulasi positip protéin aktivator (CAP) dina transkripsi?
Cyclic adenylate (cAMP) reséptor protéin CRP (cAMP reséptor protéin), kompléks dibentuk ku kombinasi cAMP jeung CRP disebut CAP (cAMPactivated protéin).Nalika E. coli tumuwuh dina medium kakurangan glukosa, sintésis CAP ngaronjat, sarta CAP boga fungsi ngaktifkeun promoters kayaning laktosa (Lac).Sababaraha promoter-gumantung CRP kakurangan ciri has -35 region sequence (TTGACA) nu promoter umum boga.Ku alatan éta, hese pikeun RNA polimérase ngabeungkeut eta.Ayana CAP (fungsi): nyata bisa ngaronjatkeun konstanta mengikat énzim jeung promoter.Ieu utamana nembongkeun dua aspék handap: ① CAP mantuan molekul énzim pikeun Orient bener ku cara ngarobah konformasi promoter jeung interaksi jeung énzim, ku kituna pikeun ngagabungkeun jeung wewengkon -10 sarta maénkeun peran ngaganti fungsi wewengkon -35.②CAP ogé tiasa ngahambat beungkeutan RNA polimérase ka situs sanés dina DNA, ku kituna ningkatkeun kamungkinan ngariung kana promotor khususna.
8. Léngkah-léngkah naon waé anu biasana kalebet dina ékspérimén rekombinasi DNA anu khas?
a.Ékstrak gén target (atanapi gén eksogén) organisme donor, teras sambungkeun sacara énzimatik kana molekul DNA sanés (véktor kloning) pikeun ngabentuk molekul DNA rékombinan énggal.b.Mindahkeun molekul DNA rékombinan kana sél panarima sarta ngayakeun réplikasi sarta ngajaga dina sél panarima.Prosés ieu disebut transformasi.c.Layar jeung identipikasi sél panarima nu geus nyerep DNA rékombinan.d.Kultur massa sél anu ngandung DNA rékombinan pikeun ngadeteksi naha gén bantuan asing dinyatakeun.
9. Pangwangunan perpustakaan gén Tilu métode pikeun screening of rekombinan dibikeun tur prosésna digambarkeun sakeudeung.
Screening résistansi antibiotik, inactivation insertional résistansi, screening bintik biru-bodas atawa screening PCR, screening diferensial, usik DNA Kalolobaan vektor kloning mawa gén résistansi antibiotik (anti-ampicillin, tetracycline).Nalika plasmid ditransferkeun kana Escherichia coli, baktéri bakal nampi résistansi, sareng anu henteu ditransfer moal gaduh résistansi.Tapi teu bisa ngabedakeun naha geus reorganisasi atawa henteu.Dina véktor anu ngandung dua gén résistansi, upami sempalan DNA asing diselapkeun kana salah sahiji gén sareng nyababkeun gén dinonaktipkeun, dua kontrol piring anu ngandung obat anu béda tiasa dianggo pikeun layar pikeun rékombinan positif.Contona, plasmid pUC ngandung gen LacZ (encoding β-galactosidase), nu bisa ngaurai substrat kromogenik X-gal (5-bromo-4-chloro-3-indole-β-D-galactoside) pikeun ngahasilkeun biru, sahingga ngarobah galur biru.Nalika DNA asing diselapkeun, gén LacZ teu tiasa dikedalkeun, sareng galurna bodas, ku kituna pikeun nyaring baktéri rékombinan.
10. Jelaskeun prosés dasar pikeun meunangkeun sato transgenik ngaliwatan sél stém émbrionik?
Sél stém émbrionik (ES) nyaéta sél émbrionik nalika kamekaran émbrionik, anu tiasa dibudayakeun sacara artifisial sareng proliferasi sareng ngagaduhan fungsi ngabédakeun kana jinis sél anu sanés.Kultur sél ES: Massa sél jero blastokista diisolasi sareng dibudayakeun.Nalika ES dibudidayakeun dina lapisan bébas feeder, éta bakal ngabédakeun kana sababaraha sél fungsional sapertos sél otot sareng sél N.Nalika dibudidayakeun dina médium anu ngandung fibroblast, ES bakal ngajaga fungsi diferensiasi.ES bisa dimanipulasi genetik, sarta fungsi diferensiasi na bisa terpadu tanpa mangaruhan fungsi diferensiasi na, nu solves masalah integrasi acak.Ngenalkeun gén éksogén kana sél stém émbrionik, teras implan kana rahim beurit awéwé hamil, janten anak anjing, sareng nyebrang pikeun kéngingkeun beurit homozigot.
