Panulis: Wang Xiaoyan, Zhao Eryu

Unit: Rumah Sakit Jiaozhou, Rumah Sakit Dongfang Gaul ka Universitas Tongji

Ayeuna, jinis sampel utama pikeun deteksi asam nukléat patogén pernapasan nyaéta swab tikoro.Aya loba rupa solusi pelestarian sampel ilahar dipaké, sakabéh nu kudu refrigerated atawa beku pikeun transportasi jeung neundeun;Hésé pikeun ngontrol sadaya prosés suhu rendah salami prosés ngumpulkeun sareng transportasi, sareng sesah mastikeun kadali kualitas sateuacan tés sampel.^[1-2].

RNase (RNase) mangrupa éndonuklease nu ngahidrolisis RNA, utamana megatkeun beungkeut fosfodiester antara nukléotida.Molekul RNase stabil pisan, aya beungkeut disulfida dina struktur, sarta aktivitas na teu merlukeun ayana kation divalent, jadi RNase teu gampang denatured, sarta gampang renature malah sanggeus suhu luhur atawa pamakéan denaturants.RNases dibagi kana endogenous jeung exogenous.RNases endogen tiasa dileupaskeun dina waktos anu sami nalika sél rusak.Ku alatan éta, ngaleungitkeun peran RNases endogenous mangrupakeun hambalan pisan kritis dina prosés ékstraksi RNA.RNases éksogén disebarkeun sacara lega.RNAse aya dina hawa, kulit manusa, rambut sareng ciduh, anu mangrupikeun alesan penting pikeun gampang degradasi RNA.^[3].

Patarosan data

CANS-CL02-A009 "Aplikasi Kualitas Laboratorium Médis sareng Pedoman Akréditasi Kompeténsi dina Widang Diagnosis Molekul" dina sarat téknis ngusulkeun yén standar kualitas cai anu pas kedah dirumuskeun dumasar kana aplikasi;Wadah kedap udara sekali pakai:

RNase / Klasifikasi

(1) RNase A

Ribonuclease A (RNase A), diturunkeun tina pankréas bovine, nyaéta endoribonuclease anu sacara khusus tiasa nyerang tungtung 3′ résidu pirimidin dina RNA, motong sitosin atanapi urasil anu dibentuk ku nukléotida anu padeukeut.Beungkeut fosfodiester, hasil ahir réaksina nyaéta 3′ pirimidin nukléotida jeung hiji oligonukléotida jeung 3′ pirimidin nukléotida dina tungtung.

(2) RNase T1

Ribonuclease T1 (RNase T1) diturunkeun tina Aspergillus orjzae, sacara khusus mangaruhan 3′-terminal fosfat guanina, sareng tempat beulahna nyaéta antara 3′ fosfat guanina sareng 5′ hidroksil nukléotida anu padeukeut.Hasil ahir réaksina nyaéta fragmen asam 3′guanilat jeung oligonukleotida jeung asam 3′guanilat dina tungtung.

(3) RNase H

Ribonuclease H (RNase H) munggaran kapanggih tina jaringan timus anak sapi, sarta gén encoding na geus diklon kana Escherichia coli.Éta sacara khusus tiasa nguraikeun DNA: untaian RNA dina duplexes hibrid RNA, hasilna oligonukleotida sareng mononukléotida kalayan tungtung 3′-OH sareng 5′-monofosfat, éta henteu tiasa nguraikeun DNA atanapi RNA untaian tunggal atanapi ganda.

RNase

Fungsi jeung pamakéan

Ribonuclease tiasa ngatalisan degradasi asam ribonukleat (RNA) sareng tiasa disintésis sacara artifisial.Salep ubar dianggo sacara topikal pikeun ngubaran trauma sareng nyeri sendi.Nurutkeun laporan, ribonuclease bisa ngarobah métabolisme sél host, ngahambat sintésis virus, ngahambat proliferasi virus influenza in vitro, sarta ngahambat formasi vaccinia jeung virus herpes dina embrio hayam.Pamakéan klinis tina ribonuclease suntik intramuscular poean 180 mg, mangpaat pikeun pengobatan encephalitis epidemic, ribonuclease bisa ngatalisan degradasi asam ribonukleat (RNA), sarta ayeuna bisa disintésis artifisial.Salep ubar dianggo sacara topikal pikeun ngubaran trauma sareng nyeri sendi.Nurutkeun laporan, ribonuclease bisa ngarobah métabolisme sél host, ngahambat sintésis virus, ngahambat proliferasi virus influenza in vitro, sarta ngahambat formasi vaccinia jeung virus herpes dina embrio hayam.Pamakéan klinis tina ribonuclease suntik intramuscular poean 180 mg mangpaat pikeun pengobatan encephalitis epidemic.

RNase

Harti Inhibitor

Harti unit inhibitor RNase: Jumlah énzim diperlukeun pikeun ngahambat 50% tina aktivitas 5ng RNase A nyaéta hiji unit.

Kumaha RNase Inhibitors Gawé

Guanidin isothiocyanate:

Guanidine isothiocyanate nyaéta sanyawa organik kalayan rumus molekul C2H6N4S.Utamana dipaké dina ubar biologis, réagen kimiawi, jsb Guanidine isothiocyanate mangrupakeun agén lysing protéin, sarta mindeng dipaké salaku komponén utama leyuran lysis dina réagen diagnostik molekular.Éta tiasa ngalis jaringan, ngancurkeun struktur sél sareng ngapisahkeun asam nukléat tina nukléoprotein, sareng gaduh denaturasi kuat kana RNase.Ieu mangrupikeun inhibitor RNase anu paling efektif ayeuna.

TRIzol mangrupikeun réagen ékstraksi RNA total novél anu tiasa langsung ékstrak total RNA tina sél atanapi jaringan.Éta ngandung zat sapertos fénol sareng guanidine isothiocyanate, anu tiasa gancang ngaganggu sél sareng ngahambat inti anu dileupaskeun ku sél.

(Tapi, guanidine isothiocyanate bahaya pikeun kaséhatan peneliti lab.)

RNasin:

Glikoprotein asam sasari tina ati beurit atawa blastoderm manusa.Rnasin mangrupikeun inhibitor RNase non-kompetitif, anu tiasa ngabeungkeut sababaraha RNases pikeun nganonaktipkeun aranjeunna.

(Lengkep rinci: https://www.foreivd.com/foreasy-rnase-inhibitor-product/)

Hsuhu:

Suhu anu luhur ogé mangrupikeun cara umum pikeun denaturasi protéin.

Diethylpyrocarbonate (DEPC):

DEPC mangrupakeun inhibitor RNase kuat tapi teu lengkep, nu bisa ngahambat aktivitas RNase ku ngagabungkeun jeung asam amino cingcin imidazole tina grup aktif RNase kana denature protéin.

Kompleks Vanadil ribonukleosida:

Kompleks dibentuk ku ion oksida vanadium sareng nukléosida, anu ngabeungkeut RNase dina bentuk zat transisi, anu ampir tiasa ngahambat kagiatan RNase.

séjén:

SDS, uréa, bumi diatomaceous, jsb ogé boga pangaruh inhibitory tangtu on RNase.

Harita Ahli

Li Yujie Kapala Téknis

Diréktur Departemen Laboratorium, Rumah Sakit Jiaozhou, Rumah Sakit Dongfang Affiliate ka Universitas Tongji

Pikeun nyegah biodegradasi RNase eksogen, masker, sarung tangan sareng topi kedah dianggo sareng sering diganti salami prosés ékstraksi RNA.Sadaya gelas kedah dipanggang dina oven garing dina 200 ° C salami 2 jam.Bahan anu dianggo pikeun baking, sapertos plastik, kedah diolah ku cai DEPC, teras dikumbah ku cai sulingan.Réagen atawa alat nu dipaké pikeun ékstraksi, pelestarian jeung idéntifikasi RNA kudu dedicated ka RNA, sarta wewengkon operasi RNA bebas kudu nyetél.

rujukan:

[1] Smith-Vaughan HC, Binks MJ, Beissbarth J, et al.Baktéri jeung virus dina nasopharynx langsung saméméh awal inféksi saluran pernapasan handap akut di barudak Australia pribumi[J].Eur J Clin Microbiol Infect Dis,2018,37 (9): 1785-1794.

[2] Cabang Kontrol Inféksi Rumah Sakit Asosiasi Kedokteran Pencegahan Cina.Pituduh pikeun ngumpulkeun sareng mariksa spésimén mikroba klinis [J].Cina Journal of Inféksi Rumah Sakit, 2018 (20): 3192-3200.

[3] "Tés Klinis Sapuluh Rébu Naha Jilid Uji Biologi Molekul"