Kuring yakin yén sadaya jelema bakal salawasna nyanghareupan masalah sapertos atanapi sapertos nalika ngalakukeun réaksi PCR, tapi kalolobaanana tiasa digolongkeun kana dua masalah utama:

Saeutik teuing amplifikasi témplat gén (amplifikasi);
Loba teuing amplifikasi gén non-target.
Ngagunakeun aditif mangrupa salah sahiji strategi umum pikeun ngajawab masalah ieu.Biasana peran aditif boga dua aspék:
struktur sekundértina gén (struktur sekundér);
Ngurangan priming non-spésifik.
Dinten ayeuna, redaktur bakal ngenalkeun sakedap ka anjeun aditif umum dina réaksi PCR sareng fungsina.
Aditif nu ngurangan struktur sekundér
sulfoksida(DMSO)
sampel génkalawan eusi GC tinggi.Sanajan kitu, DMSO ogé greatly ngurangan aktivitas Taq polymerase.Ku alatan éta, dulur kudu saimbang aksésibilitas template jeung aktivitas polimerase nu.Éditor nunjukkeun yén anjeun tiasa nyobian konsentrasi DSMO anu béda, sapertos ti 2% dugi ka 10%, pikeun milarian konsentrasi anu cocog sareng ékspérimén anjeun.
Detergents non-ionik
Deterjen non-ionik, sapertos 0,1-1% Triton X-100, Tween 20 atanapi NP-40, biasana ngirangan struktur sekundér DNA.Sanajan ieu bisa ningkatkeun amplifikasi gén template, éta ogé bakal ngabalukarkeun gangguan tina Gedekeun non-spésifik.Janten, aditif ieu tiasa dianggo saé pikeun réaksi PCR ngahasilkeun rendah tanpa lebu, tapi henteu saé pikeun réaksi RRC anu henteu murni.Kauntungan sejen tina detergents non-ionik nyaéta ngurangan kontaminasi SDS.Biasana nalika prosés ékstraksi DNA, SDS bakal dibawa ka léngkah PCR, anu ngahambat pisan kagiatan polimérase.Ku alatan éta, nambahkeun 0,5% Tween-20 atawa Tween-40 kana réaksi bisa neutralize épék négatip tina SDS.
Bétaina_
Betaine tiasa ningkatkeun amplifikasi DNA ku cara ngirangan formasi struktur sekundér sareng umumna mangrupikeun "misteri" tambahan pikeun kit PCR komérsial.Upami anjeun hoyong nganggo betaine, anjeun kedah nempatkeun betaine atanapi betaine mono-hydrate (Betaine atanapi Betaine mono-hydrate), tapi henteu betaine hydrochloride (Betaine HCl), nyaluyukeun kana konsentrasi akhir 1-1,7M.Betaine ogé tiasa ngabantosan ningkatkeun spésifisitas sabab ngaleungitkeun gumantungna komposisi pasangan basa tina lebur DNA / denaturasi DNA.
Aditif pikeun ngurangan priming non-spésifik
Formamide
Formamide mangrupikeun aditif PCR organik anu biasa dianggo.Bisa ngagabungkeun jeung alur utama jeung alur minor dina DNA, kukituna ngurangan stabilitas master DNA héliks ganda jeung nurunkeun suhu lebur DNA.Konsentrasi formamide anu dianggo dina percobaan PCR biasana 1% -5%.
Tétramétilamonium klorida( TMAC)
Tetramethylammonium klorida tiasa ningkatkeun spésifisitas hibridisasi (spésifisitas hibridisasi) sareng ningkatkeun suhu lebur DNA.Ku kituna, TMAC bisa nyabut priming non-spésifik sarta ngurangan misbinding DNA jeung RNA.Lamun makeprimers degeneratedina réaksi PCR, inget pikeun nambahkeun TMAC, nu ilahar dipaké dina konsentrasi 15-100mM.
Aditif umum lianna
Salian dua kategori aditif didadarkeun di luhur, aya loba aditif umum dina réaksi PCR, sanajan maranéhna boga fungsi béda, aranjeunna ogé pohara penting.
ion magnésium
Ion magnésium mangrupikeun kofaktor (kofaktor) polimérase anu penting, nyaéta, tanpa ion magnésium, polimérase henteu aktip.Tapi, teuing ion magnésium ogé bisa mangaruhan efisiensi polimérase.Konsentrasi ion magnésium dina unggal réaksi PCR bakal rupa-rupa.Agen chelating (sapertos EDTA atanapi citrate), konsentrasi dNTP sareng protéin sadayana mangaruhan konsentrasi ion magnésium.Janten, upami anjeun gaduh masalah sareng percobaan PCR anjeun, anjeun tiasa nyobian ngarobih konsentrasi ion magnésium anu béda-béda, contona, tina 1.0 dugi ka 4.0mM, kalayan interval 0.5-1mM diantarana.
Perhatos yén sababaraha siklus freeze-thaw tiasa nyababkeun stratifikasi konsentrasi larutan magnesium klorida.Ku alatan éta, anjeun kudu ngabubarkeun eta sagemblengna saméméh unggal pamakéan, sarta campur ogé saméméh pamakéan éta.
Albumin sérum sapi(Bovine albumin, BSA)
Dina percobaan kimia molekular, albumin sérum sapi mangrupa aditif anu umum pisan, utamana dina nyerna énzim restriksi jeung percobaan PCR.Dina réaksi PCR, BSA mantuan pikeun ngurangan kontaminan kayaning sanyawa fénol.Sarta eta oge ngomong yén éta bisa ngurangan adhesion of réaktan kana témbok tina tube test.Dina réaksi PCR, biasana konsentrasi BSA ditambahkeun bisa ngahontal 0,8 mg/ml.
 
Produk patali:
Pahlawan PCR(kalayan pewarna)
Pahlawan PCR