PCR langsung nyaéta réaksi anu langsung ngagunakeun jaringan sato atawa tutuwuhan pikeun amplifikasi tanpa ékstraksi asam nukléat.Dina sababaraha cara, PCR langsung tiasa dianggo sapertos PCR biasa

Beda utama nyaéta panyangga custom dipaké dina PCR langsung, sampel bisa langsung subjected kana réaksi PCR tanpa ékstraksi asam nukléat, tapi aya sarat saluyu pikeun kasabaran énzim jeung kasaluyuan panyangga aub dina réaksi PCR langsung.

Sanajan aya leuwih atawa kurang sambetan PCR dina sampel umum, PCR langsung masih bisa ngahontal amplifikasi dipercaya dina aksi énzim jeung buffers.Réaksi PCR tradisional merlukeun asam nukléat kualitas luhur salaku citakan, nu bisa ngahambat kamajuan mulus réaksi PCR lamun citakan ngandung protéin jeung pangotor séjén.PCR langsung ayeuna mangrupikeun salah sahiji téknologi anu langkung populér dina bidang diagnostik molekular.

01 Direct PCR asalna dipaké pikeun sato jeung tutuwuhan

Aplikasi pangheubeulna ngeunaan PCR langsung aya dina widang sato jeung tutuwuhan, kayaning getih, jaringan jeung bulu tina beurit, ucing, hayam, kelenci, domba, sapi, jeung sajabana, daun tutuwuhan jeung siki, jsb, dipaké pikeun diajar genotyping, transgenik, deteksi plasmid, analisis knockout Gene, idéntifikasi sumber DNA, idéntifikasi spésiés, analisis SNP.

Widang ieu ngagaduhan sababaraha fitur umum, nyaéta, eusi gén target rélatif luhur sareng ékstraksi asam nukléat nyusahkeun, ku kituna PCR langsung henteu ngan ukur ngahémat waktos sareng gaduh dampak anu alit dina hasil, tapi ogé ngahémat biaya.

PCR langsung dipaké pikeun deteksi patogén nyaéta masalah taun panganyarna, sababaraha pabrik réagen PCR geus nyieun loba usaha arah ieu nalika nyieun inovasi.Utamana dina wabah COVID-19 ieu, seueur produk deteksi sapertos anu muncul di pasar, sapertos Kit Deteksi Asam Nukléat SARS-CoV-2 (Multiplex PCR Fluorescent Probe Method) ditalungtik sareng dikembangkeun ku Foregene, anu ngagunakeun téknologi RT PCR Real-time (rRT-PCR) pikeun deteksi kualitatif tina SARS-CoVharyngeal-2 atanapi nasropharyngeal asam nukleat manusa.

Foregene mangrupikeun salah sahiji perusahaan anu nganggo téknologi Direct PCR, pikeun ngadeteksi ORF1ab normal, N, E, sarengvarian turunan asam nukléat dina sampel swab nasopharyngeal atawa orofaringeal manusa kayaning SARS-CoV-2 B.1.1.7 nasab (UK), B.1.351 nasab (ZA), B.1.617 nasab (IND) jeung P.1 nasab (BR).

02  Réagen diperlukeun pikeun PCR langsung

Sampel Lysate

The lysate sampel bisa ngonpigurasi ku sorangan atawa dibeuli.Beda dina komposisi merek béda tina lysate bakal nyieun kamampuhan lysing béda, lajeng waktos lysing bakal rada béda.Salaku conto, pikeun persiapan sampel jaringan sato, 30 menit atanapi lisis sapeuting umumna disarankeun, sareng solusi lisis pikeun virus kisaran 3-10 menit.

Campuran master PCR

Disarankeun make hot-start DNA polymerase pikeun ningkatkeun amplifikasi husus sareng ningkatkeun kamampuan amplifikasi.Inti PCR langsung nyaéta polimérase anu toleran pisan.

Ngaleungitkeun atanapi ngahambat komponén dina sampel anu mangaruhan amplifikasi DNA

Saatos sampel diolah ku lisat, protéin, lipid jeung lebu sél lianna bakal dileupaskeun, zat ieu bakal ngahambat réaksi PCR.Ku alatan éta, PCR langsung merlukeun tambahan panyabutan atawa sambetan pakait pikeun ngurangan pangaruh faktor ieu.

03  Kumpulan lima titik pangaweruh PCR langsung

Kahiji, téhnologi Direct PCR nyaéta téhnologi PCR langsung pikeun sagala rupa sampel biologis.Dina kaayaan téknis ieu, teu perlu misahkeun jeung nimba asam nukléat, langsung ngagunakeun sampel jaringan salaku obyék, sarta nambahkeun primers gén target anu ngalakukeun réaksi PCR.

Kadua, téhnologi langsung PCR teu ukur téhnologi amplifikasi template DNA tradisional, tapi ogé ngawengku RNA template transkripsi sabalikna PCR.

Katilu, téhnologi langsung PCR teu ngan langsung ngalakukeun réaksi PCR kualitatif rutin dina sampel jaringan, tapi ogé ngawengku Real-Time réaksi qPCR, nu merlukeun sistem réaksi boga kamampuhan gangguan fluoresensi anti-tukang kuat sarta fluoresensi endogenous quenchers kamampuhan antagonistic.

Kaopat, sampel anu disasarkeun ku téknologi Direct PCR ngan ukur peryogi sékrési citakan asam nukléat, sareng henteu ngaleungitkeun protéin, polisakarida, ion uyah, sareng sajabana anu ngaganggu réaksi PCR.Anu ngabutuhkeun polimérase asam nukléat sareng Campuran PCR dina sistem réaksi gaduh résistansi sareng adaptasi anu saé pikeun mastikeun kagiatan énzim sareng akurasi réplikasi dina kaayaan anu kompleks.

Kalima, sampel jaringan sasaran ku téhnologi Direct PCR tanpa perlakuan pengayaan asam nukléat jeung jumlah template pisan leutik, nu merlukeun sistem réaksi boga sensitipitas pisan tinggi jeung efisiensi amplifikasi.