Fitur anu luar biasa tina réaksi PCR nyaéta kapasitas amplifikasi anu ageung sareng sensitipitas anu luhur pisan.Dina raraga ngaronjatkeun kinerja PCR jeung efisiensi deteksi, kami komitmen pikeun ngaronjatkeun kapasitas Gedekeun PCR jeung sensitipitas deteksi, tapi nyeri sirah aya dina prosés percobaan.Positip palsu sering kajantenan, sareng sajumlah leutik kontaminasi silang atanapi kontaminasi produk PCR tiasa nyababkeun positip palsu dina percobaan.
Lima jinis kontaminasi produk PCR
Aya seueur alesan pikeun kontaminasi PCR, anu kasarna tiasa dibagi kana kategori ieu:
Kontaminasi spésimén utamana disababkeun ku kontaminasi wadahna pikeun ngumpulkeun spésimén, atanapi nalika spésimén disimpen, bocor kaluar tina wadahna kusabab sealing leupas, atanapi spésimén ditatan ka luar wadahna, anu nyababkeun kontaminasi silang;Kontaminasi ngakibatkeun kontaminasi antara spésimén;sababaraha spésimén mikroba, khususna virus, tiasa nyebarkeun sareng aerosol atanapi ngabentuk aerosol, nyababkeun kontaminasi silih.
Alesan utama nyaéta nalika nyiapkeun réagen PCR, sampel gun, wadahna, cai sulingan ganda sareng solusi sanésna kacemar ku citakan asam nukléat PCR.
Di laboratorium biologi molekular sareng sababaraha laboratorium anu ngagunakeun plasmid kloning salaku kontrol positif, masalah kontaminasi plasmid kloning ogé umum.Kusabab eusi kloning plasmid dina volume Unit cukup luhur, sarta leuwih parabot jeung réagen diperlukeun dina prosés purifikasi, sarta plasmid dina sél hirup kamungkinan pisan kacemar alatan tumuwuhna kuat sarta pangabisa baranahan sél hirup.
Kontaminasi produk anu diamplifikasi mangrupikeun masalah kontaminasi anu paling umum dina réaksi PCR.Kusabab kuantitas salinan produk PCR badag (umumna 1013 salinan / ml), nu jauh leuwih luhur ti wates angka salinan deteksi PCR, jumlah pisan leutik kontaminasi produk PCR bisa ngabalukarkeun positip palsu.
Polusi aerosol mangrupikeun bentuk kontaminasi produk PCR anu paling dipikaresep, sareng éta ogé paling gampang ditingali.Éta kabentuk ku gesekan antara permukaan cair sareng hawa.Sacara umum, kontaminasi aerosol tiasa kabentuk nalika tutupna dibuka, nalika sampel disedot, atanapi bahkan nalika tabung réaksi digoncang sacara kuat.Numutkeun itungan, partikel aerosol tiasa ngandung 48.000 éksemplar, ku kituna polusi anu disababkeun ku éta mangrupikeun masalah anu pantes perhatian khusus.
Khususna, laboratorium nguji sering nganggo pasangan primer anu sami pikeun nguji gén anu tangtu.Kana waktu, jumlah badag kontaminasi produk PCR bakal lumangsung di rohangan laboratorium.Sakali kontaminasi sapertos lumangsung, hese ngaleungitkeun éta dina waktu anu singget.
Pikeun tilu jinis polusi anu munggaran, urang tiasa nganggo cara anu efektif pikeun nyegah, tapi polusi anu disababkeun ku produk PCR hese dicegah, khususna dina pangwangunan laboratorium PCR anu henteu standar.Dina prosés PCR, nalika ujung pipette nyedot sarta niup cairanana, sarta panutup tabung PCR dibuka, hiji aerosol bakal kabentuk.Molekul DNA nu dibawa ku aerosol (hiji aerosol bisa mawa puluhan rébu DNA) hésé ngaleungitkeun sabab ngambang dina hawa.Sakali babak salajengna percobaan PCR diwanohkeun, positip palsu pasti bakal kajantenan.
Ditémbongkeun saperti dina gambar di handap ieu, kontrol négatip ogé amplified pita dipikaresep pakait:
Bagian kahiji tina masalah polusi sareng pencegahan PCR ieu diwanohkeun di dieu.Masalah salajengna bakal mawa anjeun bagian kadua "Pencegahan kontaminasi produk PCR", janten parios!
waktos pos: Jul-25-2017
