Tuli dédéngéan (HL) nyaéta kasakit cacad indrawi anu paling umum di manusa.Di nagara maju, sakitar 80% kasus tunarungu prelingual di barudak disababkeun ku faktor genetik.Anu paling umum nyaéta cacad gén tunggal (sapertos anu dipidangkeun dina Gbr. 1), mutasi gén 124 kapanggih aya hubunganana sareng gangguan dédéngéan nonsyndromic manusa, sésana disababkeun ku faktor lingkungan.A susuk cochlear (alat éléktronik disimpen dina ceuli batin nu nyadiakeun stimulasi listrik langsung ka saraf auditory) nyaeta jauh pilihan paling mujarab pikeun ngubaran HL parna, bari bantuan dédéngéan (hiji alat éléktronik éksternal anu ngarobah jeung amplifies gelombang sora) bisa mantuan Pasén kalawan HL sedeng.Nanging, ayeuna teu aya ubar anu sayogi pikeun ngubaran HL turunan (GHL).Dina taun-taun ayeuna, terapi gen parantos nampi perhatian anu langkung ageung salaku pendekatan anu ngajangjikeun pikeun ngubaran disfungsi ceuli batin.

Gbr1.Sebaran tipe variasi nu patali jeung tunarungu.[1]

Anyar-anyar ieu, para ilmuwan ti Salk Institute sareng Universitas Sheffield nyebarkeun hasil panalungtikan ngeunaan Terapi Molekul - Métode & Pangembangan Klinis [2], anu nunjukkeun prospek aplikasi anu lega pikeun terapi gén in vivo pikeun pireu turunan.Uri Manor, asisten profesor panalungtikan di Salk Institute sarta diréktur Waitt Center pikeun Advanced Biophotonics, cenah lahir jeung leungitna dédéngéan parna sarta ngarasa yén malikkeun dédéngéan bakal jadi kado éndah.Panalitian saméméhna mendakan yén Eps8 mangrupikeun protéin pangaturan aktin kalayan kagiatan beungkeutan aktin sareng capping;dina sél rambut cochlear, kompléks protéin dibentuk ku Eps8 kalawan MYO15A, WHIRLIN, GPSM2 na GNAI3 utamana aya dina paling The tips of stereocilia panjang, nu bareng jeung MYO15A localize BAIAP2L2 di tips of stereocilia pondok, diperlukeun pikeun pangropéa bundles bulu.Ku alatan éta, Eps8 bisa ngatur panjang stereocilia sél bulu, nu penting pikeun fungsi dédéngéan normal;Hapusan atanapi mutasi Eps8 bakal ngakibatkeun stereocilia pondok, anu ngajantenkeun teu tiasa leres ngarobih sora janten sinyal listrik pikeun persépsi otak, anu nyababkeun pireu..Dina waktos anu sami, kolaborator Walter Marcotti, profesor di Universitas Sheffield, mendakan yén sél rambut henteu tiasa berkembang normal upami henteuna Eps8.Dina ulikan ieu, Manor jeung Marcotti teamed up pikeun nalungtik naha nambahkeun Eps8 kana sél stereociliary bisa mulangkeun fungsi maranéhanana sarta, kahareupna ngaronjatkeun dédéngéan di mencit.Tim panalungtik ngagunakeun adeno-associated virus (AAV) véktor Anc80L65 pikeun nganteurkeun runtuyan coding ngandung liar-tipe EPS8 kana cochlea of ​​Eps8-/- beurit P1-P2 bayi ku suntik mémbran jandela buleud;dina sél bulu cochlear mouse Fungsi stereocilia ieu repaired saméméh maranéhna matured;sarta pangaruh perbaikan ieu dicirikeun ku téhnologi Imaging jeung pangukuran stereocilia.Hasilna nunjukkeun yén Eps8 ningkatkeun panjang stereocilia sareng malikkeun fungsi sél rambut dina sél frekuensi rendah.Éta ogé kapanggih yén, kana waktu, sél seemed leungit kamampuhan maranéhna pikeun rescued ku terapi gén ieu.Implikasi nya éta perlakuan ieu bisa jadi kudu dikaluarkeun dina utero, sakumaha Eps8-/- sél bulu mungkin geus matured atawa akumulasi karuksakan saluareun perbaikan sanggeus beurit dilahirkeun."Eps8 mangrupikeun protéin anu ngagaduhan seueur fungsi anu béda, sareng masih seueur anu kedah dijalajah," saur Manor.Panaliti kahareup bakal kalebet nalungtik pangaruh terapi gén Eps8 dina malikkeun dédéngéan dina tahap pangembangan anu béda, sareng naha mungkin pikeun manjangkeun kasempetan perawatan.Kabeneran, dina bulan Nopémber 2020, Profesor KarenB Avraham ti Universitas Tel Aviv di Israel nyebarkeun hasil na dina jurnal EMBO Molecular Medicine [3], ngagunakeun téknologi terapi gen inovatif pikeun nyiptakeun virus sintétik anu aya hubunganana sareng adeno AAV9-PHP.B, The cacad gén dina sél bulu tina Syne4-/- beurit ieu repaired ku injecting virus mawa runtuyan coding of Syne4 kana ceuli batin beurit, sahingga eta bisa asup kana sél bulu jeung ngaleupaskeun bahan genetik dibawa, sahingga aranjeunna dewasa sarta fungsi normal (saperti dina Gbr. 2).

Gbr2.Répréséntasi skéma tina anatomi ceuli batin, kalayan fokus kana organ Corti sareng fungsi sélular nesprin-4.

Ieu bisa ditempo yén pamakéan terapi gén pikeun ngahontal tujuan ngubaran kasakit turunan dina tingkat gén ku inserting, miceun atawa koréksi sagala gén mutated pikeun pengobatan (nyaéta, ngadalikeun parobahan genetik dina kasakit) boga pangaruh klinis tinggi.prospek aplikasi.Métode terapi gén ayeuna pikeun pireu kakurangan genetik tiasa dibagi kana kategori ieu:

ngagantian gén

ngagantian gén téh arguably paling "lurus" formulir terapi gén, dumasar kana identifying tur ngaganti gén cacad ku salinan normal atawa liar-tipe gén.Ulikan terapi gén ceuli batin munggaran anu suksés pikeun gangguan dédéngéan disababkeun ku ngahapus gén transporter glutamat vesikular 3 (VGLUT3);AAV1-dimédiasi pangiriman overexpression VGLUT3 exogenous dina sél bulu ceuli batin (IHCs) Bisa ngahasilkeun recovery dédéngéan sustained, recovery morfologi synaptic pita parsial, sarta réspon convulsive [4].Sanajan kitu, dina conto kaasup dua ngagantian gén AAV-dikirimkeun ditétélakeun dina bubuka di luhur, hal anu penting pikeun dicatet yén modél mouse dipaké pikeun tipe tangtu gangguan dédéngéan turunan ngahapus gén anu temporally béda ti manusa, sarta dina beurit P1 , ceuli batin aya dina tahap dewasa ngembangkeun.Sabalikna, manusa dilahirkeun ku ceuli batin anu asak.Bedana ieu nyegah kamungkinan aplikasi hasil beurit pikeun pengobatan gangguan pireu turunan manusa iwal terapi gen dikirimkeun ka Ceuli beurit dewasa.

Ngédit Gén: CRISPR / Cas9

Dibandingkeun sareng "panggantian gén", pamekaran téknologi ngedit gén parantos nyababkeun subuh pikeun ngubaran panyakit genetik tina akar.Importantly, métode ngedit gén nyieun up for shortcomings sahiji metodeu terapi gén overexpression tradisional nu teu cocog pikeun kasakit deafness turunan dominan, jeung masalah yén métode overexpression teu lepas panjang.Saatos peneliti Cina husus knocked kaluar alél mutan Myo6C442Y dina Myo6WT / C442Y beurit ngagunakeun sistem na rohangan ngédit gén AAV-SaCas9-KKH-Myo6-g2, sarta dina 5 bulan knockout nu, beurit fungsi auditory model ieu disimpen;Dina waktos anu sami, éta ogé diperhatoskeun yén tingkat kasalametan sél rambut dina ceuli batin ningkat, bentuk silia janten teratur, sareng indikator éléktrofisiologis dilereskeun [5].Ieu mangrupikeun kajian munggaran di dunya anu ngagunakeun téknologi CRISPR / Cas9 pikeun pengobatan pireu turunan anu disababkeun ku mutasi gen Myo6, sareng éta mangrupikeun kamajuan panalungtikan anu penting pikeun téknologi édisi gen pikeun pengobatan pireu turunan.Tarjamahan klinis tina pengobatan nyayogikeun dasar ilmiah anu padet.

Métode pangiriman terapi gen

Supados terapi gen suksés, molekul DNA taranjang teu tiasa nembus sél sacara efektif kusabab hidrofilik sareng muatan négatip tina gugus fosfat, sareng pikeun mastikeun integritas molekul asam nukléat anu ditambahan, metode anu aman sareng efektif kedah dipilih.DNA supplemented dikirimkeun ka sél target atawa jaringan.AAV loba dipaké salaku wahana pangiriman pikeun pengobatan kasakit alatan éfék inféksi tinggi na, immunogenicity low, sarta tropisme lega kana sagala rupa jenis jaringan.Ayeuna, awak badag karya panalungtikan geus ditangtukeun tropisme subtypes béda AAV relatif ka tipe sél béda dina cochlea beurit.Ngagunakeun ciri pangiriman AAV digabungkeun jeung promoters sél-spésifik bisa ngahontal éksprési sél-spésifik, nu bisa ngurangan épék kaluar-target.Salaku tambahan, salaku alternatif pikeun vektor AAV tradisional, vektor AAV sintétik anyar terus-terusan dikembangkeun sareng nunjukkeun kamampuan transduksi anu unggul dina ceuli batin, dimana AAV2 / Anc80L65 anu paling seueur dianggo.Métode pangiriman non-virus tiasa dibagi deui kana metode fisik (microinjection sareng electroporation) sareng metode kimia (basis lipid, basis polimér, sareng nanopartikel emas).Duanana pendekatan geus dipaké dina pengobatan gangguan deafness turunan sarta geus ditémbongkeun kaunggulan béda jeung watesan.Salian wahana pangiriman pikeun terapi gén salaku wahana, pendekatan anu béda pikeun administrasi gén in vivo tiasa dianggo dumasar kana jinis sél target anu béda, rute administrasi, sareng khasiat terapi.Struktur intricate ceuli batin ngajadikeun hésé ngahontal sél target jeung distribusi agén ngedit génom slow.Labirin mémbran aya dina labirin tulang tina tulang temporal sareng kalebet saluran koklea, saluran semisirkular, utrikulus, sareng balon.Isolasi relatifna, sirkulasi limfatik minimal, sareng pamisahan tina getih ku halangan maze getih ngabatesan pangiriman terapi sistemik anu efektif pikeun mencit neonatal wungkul.Pikeun kéngingkeun titer virus anu cocog pikeun terapi gen, suntikan lokal langsung vektor virus kana ceuli batin diperyogikeun.ruteu ngadegkeun suntik ngawengku [6]: (1) mémbran jandela buleud (RWM), (2) tracheostomy, (3) cochleostomy endolymphatic atanapi perilymphatic, (4) mémbran jandela buleud tambah Tube fenestration (CF) (sakumaha dina Gbr. 3).

Gbr3.pangiriman ceuli batin terapi gén.

Sanaos seueur kamajuan anu dilakukeun dina terapi gen, dumasar kana tujuan translasi klinis, langkung seueur padamelan anu kedah dilakukeun sateuacan terapi gen tiasa janten pilihan perawatan anu munggaran pikeun penderita panyakit genetik, khususna dina pamekaran vektor sareng metode pangiriman anu aman sareng efektif.Tapi kami yakin yén dina mangsa nu bakal datang, jenis perlakuan ieu bakal jadi pokok tina terapi pribadi tur bakal boga dampak hugely positif dina kahirupan jalma kalawan gangguan genetik jeung kulawarga maranéhanana.

Foregene ogé parantos ngaluncurkeun kit saringan throughput tinggi pikeun gén anu dituju, anu gancang sareng tiasa ngalakukeun transkripsi sabalikna sareng réaksi qPCR tanpa ékstraksi RNA.

Tumbu produk

Kit RT-qPCR Cell Direct—Taqman/SYBR GREEN I

Kanggo inpo produk langkung seueur, mangga ngahubungi:

overseas@foregene.com