Timbel

RNA non-coding panjang, lncRNA nyaéta RNA non-coding anu panjangna leuwih ti 200 nukléotida, umumna antara 200-100000 nt.lncRNA ngatur éksprési gén dina tingkat épigénétik, transkripsi sareng post-transkripsi, sareng ngiringan dina silencing kromosom X, imprinting génom sareng modifikasi kromatin, aktivasina transkripsi, gangguan transkripsi, transportasi nuklir, régulasi siklus sél, régulasi diferensiasi sél, sareng épék kompensasi dosis, pangaruh kompensasi dosis, pangaruh kompensasi dosis, sareng pangaruh kompensasi anu penting pikeun manusa. , sarta ayeuna salah sahiji hot spot dina widang biomedicine.

01  Jinis sareng karakteristik LncRNA

lncRNA dibagi kana sababaraha jinis dumasar kana sumber anu béda tina kabentukna, sapertos anu dipidangkeun dina gambar di luhur.Mibanda ciri handap:

1. lncRNAs biasana leuwih panjang, kalayan ekspresi dinamis jeung métode splicing béda salila diferensiasi
2. Dibandingkeun jeung gén coding, lncRNA biasana boga tingkat ekspresi handap
3. Kalolobaan lncRNAs gaduh spésifisitas éksprési temporal jeung spasial atra dina prosés diferensiasi jaringan tur ngembangkeun.
4. Aya éksprési ciri dina tumor jeung panyakit séjénna
5. Lokasi subsélular lncRNA rupa-rupa
6. Runtuyan ieu low di konservasi, tapi fungsi ngabogaan gelar tangtu konservasi, jsb.

02 Patarosan anu Sering Ditaroskeun ngeunaan LncRNA Reverse Transcription

Kusabab eusi lncRNA rendah dina sél, panjangna panjang sareng struktur tingkat luhur, RNA sapertos kitu sering ngagaduhan struktur kompleks sapertos puteran batang atanapi jepit rambut, sareng RT-qPCR rawan masalah transkripsi sabalikna anu gagal atanapi efisiensi rendah.

03 Solusi transkripsi balik LncRNA

Dina aturan sentral, prosés virus RNA ngagunakeun reverse transcriptase sorangan pikeun sintésis DNA maké RNA salaku citakan disebut reverse transcription.Prosés ngagunakeun RNA virus reverse transcriptase pikeun sintésis cDNA template in vitro disebut reverse transcription.Unsur utama kaasup dina sistem transkripsi sabalikna: template RNA, reverse transcriptase, primers sarta komponén séjén.

1.témplat RNA

Pangaruh citakan RNA dina transkripsi sabalikna dicerminkeun dina strukturna, kamurnian sareng integritasna.Nu leuwih luhur purity jeung integritas RNA sasari, nu leuwih luhur efisiensi transkripsi sabalikna jeung leuwih akurat hasil kuantitatif saterusna.RNA dimurnikeun ku réagen ékstraksi RNA ilahar dipaké mindeng ngandung résidu alkohol jeung uyah guanidine, nu boga pangaruh inhibisi kuat dina paling reverse transcriptase.

2. Reverse transcriptase

Reverse transcriptase boga pangaruh konci dina sakabéh sistem transkripsi sabalikna.Suhu anu cocog pikeun reverse transcriptase anu dianggo di kalolobaan laboratorium umumna 42°C.Nyatana, pambukaan struktur RNA tingkat luhur butuh suhu anu langkung luhur, sareng syarat pikeun transkripase sabalikna langkung luhur.

3.Primer

Primer transkripsi sabalikna ngawengku primers gen-spésifik, primers acak jeung primers Oligo dT.Kaseueuran lncRNA henteu ngandung buntut polyA, sareng penting pikeun cocog leres sareng primer acak sareng Oligo dT.

4.Komponén séjén

Dina panempoan kanyataan yén RNA utamana gampang pikeun nguraikeun, bubuka komponén dina sistem transkripsi sabalikna bisa minimal, nu bisa éféktif nyegah asupna RNase sarta mastikeun kamajuan lemes tina transkripsi sabalikna.

Foregenediala tina citakan RNA, transkripsi ngabalikeun ka qPCR

Sacara komprehensif ngiringan deteksi lncRNA anjeun

Hewan Total RNA IpangsoranganKit (kalayan kolom panyabutan gDNA)

RNA total sel IpangsoranganKit (kalayan kolom panyabutan gDNA)

Lnc-RT HeroTM I(Kalayan gDNase)(Super Premix pikeun sintésis cDNA untaian kahiji tina lncRNA)

Real Time PCR EasyTM-SYBR Héjo I

Akauntungan ofEkstraksi RNA:

Kit ngagunakeun téknologi ékstraksi RNA generasi katilu, henteu kedah nganggo DNase.

11 menit ti 96, 24, 12, jeung 6-sumur plat sél berbudaya, ékstraksi efisiensi tinggi gDNA bébas, purity tinggi, kualitas luhur total sél RNA.

Keuntungan transkripsi balik lncRNA:

Sistem transkripsi sabalikna anu dikembangkeun khusus pikeun LncRNA pikeun gancang ngaleungitkeun kontaminasi DNA génomik.

Sistem transkripsi ngabalikeun gaduh stabilitas termal anu luhur sareng masih gaduh kinerja transkripsi sabalikna anu saé dina 50°C.

Témplat kalayan eusi GC anu luhur sareng struktur sekundér anu kompleks tiasa dibalikkeun kalayan efisiensi anu luhur.

Kaunggulanof qPCR:

Hot start Foregene Taq Polymerase gaduh efisiensi amplifikasi anu langkung luhur, sensitipitas amplifikasi anu langkung luhur, sareng spésifisitas amplifikasi anu langkung luhur

The dioptimalkeun Real PCR Easy Mix ngajadikeun SYBR Héjo I mibanda sensitipitas deteksi luhur, sarta inténsitas fluoresensi nyaeta 3-5 kali tina produk sarupa, nu bisa minuhan kaperluan tipena béda percobaan kuantitatif fluoresensi.