Anyar-anyar ieu, kuring mendakan anu luar biasa!Seueur ahli ékspérimén canggih di sabudeureun anjeunna henteu terang sababaraha titik pangaweruh ékspérimén anu dasar pisan.

Contona, naha Sadérék bisa ngajawab pananya-pananya di handap ieu?

Naha aya bédana antara OD260 sareng A260?Naon hartina masing-masing?
OD teh singketan tina dénsitas optik (optical density), A nyaéta singketan tina absorbance (absorbance), dua konsep sabenerna sarua, "optical density" nyaeta "absorbance", tapi "optical density" saluyu jeung paling standar nasional jeung leuwih standar.

Biasana urang ngukur nilai OD dina 260nm keur ngitung konsentrasi asam nukléat, jadi naon 1OD ngagambarkeun?
Asam nukléat boga puncak nyerep maksimum dina panjang gelombang 260nm, nu ngandung duanana DNA jeung RNA, kitu ogé fragmén asam nukléat fragmén (ieu titik konci).
Nilai OD diukur dina panjang gelombang 260 nm kacatet salaku OD260.Lamun sampel murni, nilai OD260 bisa ngitung konsentrasi sampel asam nukléat.
1 OD260 = 50 μg/ml dsDNA (DNA untai ganda)
= 37 μg/ml ssDNA (DNA untai tunggal)
= 40 μg/ml RNA
=30 μg/ml dNTPs (oligonukleotida)
Naha aya sambungan sareng bédana antara RT-PCR, Realtime-PCR sareng QPCR?
RT-PCR pondok pikeun Reverse Transcription PCR
Real Time PCR = qPCR, pondok pikeun Quantitative Real Time PCR
Sanajan Real Time PCR (real-time fluoresensi kuantitatif PCR) jeung Reverse Transcription PCR (reverse transcription PCR) duanana sigana disingget jadi RT-PCR.Tapi konvénsi internasional nyaéta: RT-PCR sacara khusus ngarujuk kana PCR transkripsi balik.

Naon nt, bp, sareng kb anu biasa dianggo pikeun ngajelaskeun panjang DNA/RNA dina biologi?
nt = nukléotida
bp = pasangan basa pasangan basa
kb = kilobase

Tangtosna, anjeun bakal nyarios yén seueur jalma henteu paduli kana detil leutik ieu!Sarerea ngalakukeun ieu, sareng teu aya anu bakal naroskeun naon éta.Anjeun terang ieu teu perlu, katuhu?

Henteu, henteu, henteu, peryogi pisan terang ieu!kusabab naon?
Kusabab anjeun hoyong posting artikel!Baraya!Naha anjeun badé kalulusan atanapi ngudag prestasi panalungtikan ilmiah, anjeun kedah ngandelkeun tulisan pikeun nyarios!

Ékstraksi asam nukléat kedah ékspérimén pangbasajanna sareng paling dasar.Kualitas ékstraksi asam nukléat langsung nangtukeun hasil percobaan saterusna.

Sanajan geus sababaraha kali ngomong, masih loba babaturan anu teu paduli.waktos Ieu kuring mutuskeun pikeun pindah kaluar artikel!

Émbaran Minimum pikeun Publikasi Percobaan PCR Real-Time Kuantitatif, disebut MIQE, Nyaéta sakumpulan tungtunan percobaan kuantitatif fluoresensi diluncurkeun sacara internasional, anu ngajukeun standar minimum pikeun inpormasi ékspérimén anu dipikabutuh pikeun ngévaluasi percobaan PCR kuantitatif fluoresensi sareng nyebarkeun artikel.Ngaliwatan kondisi ékspérimén jeung métode analisis nu disadiakeun ku experimenter, nu reviewers bisa hadé evaluate validitas skéma ékspérimén panalungtik.

Ieu bisa ditempo yén dina bagian ékstraksi asam nukléat, item deteksi handap geus diajukeun,

"E" nunjukkeun inpormasi anu kedah disayogikeun sareng "D" nunjukkeun inpormasi anu kedah disayogikeun upami diperyogikeun.

Bentukna rumit pisan, kanyataanna, kuring hoyong nyarios yén sadayana kedah ngamimitian

purity (D), ngahasilkeun (D), integritas (E) jeung konsistensi (E) pikeun evaluate asam nukléat dina opat aspék ieu.

Numutkeun kabiasaan eksperimen, mimiti ngobrol ngeunaan métode evaluasi purity jeung konsentrasi.

Pangukuran OD mangrupikeun metode deteksi anu paling dipikaresep sareng paling gampang pikeun ékspérimén.Sedengkeun pikeun prinsipna, kuring moal ngémutan rinci di dieu.Seueur laboratorium ayeuna nganggo spéktrofotométer ultra-mikro pikeun langsung nganalisis sampel asam nukléat sacara kuantitatif.Bari mintonkeun nilai absorbansi, program langsung masihan nilai konsentrasi (asam nukléat, protéin jeung ngalelep fluoresensi) jeung babandingan patali.Sedengkeun pikeun analisis nilai OD, Simpen gambar ieu jeung anjeun bakal rupa.

Daptar solusi nilai OD universal

Sanajan kitu, aya sababaraha caveats nu kudu dibawa kaluar misah pikeun anjeun.

(Barina ogé, kuring terang anjeun kedah janten anu nyimpen sareng ngantosan dugi ka anjeun peryogina!)

Catetan 1 Parabot

Nilai OD bakal kapangaruhan ku alat anu béda.Salami OD260 aya dina rentang anu tangtu, nilai OD230 sareng OD280 bermakna.Salaku conto, kisaran nyerep tina Eppendorf D30 umum dina 260nm nyaéta 0 ~ 3A, sareng NanoDrop One of Thermo nyaéta dina 260nm.Kisaran absorbance 0.5 ~ 62.5A.

Catetan 2réagen éncér

Nilai OD bisa kapangaruhan ku éncér réagen béda.Contona, bacaan OD260/280 RNA dimurnikeun dina pH7,5 10mM Trispanyangga nyaeta antara 1.9-2.1, bari dileyuran cai nétralrasio bakal leuwih handap, meureun ngan 1,8-2,0, tapi ieu lain hartosna yén kualitas RNA robah Béda.

Catetan 3Zat sésa

Ayana zat sésa-sésa bakal mangaruhan katepatan pangukuran konsentrasi asam nukléat, ku kituna perlu nyingkahan résidu protéin, fénol, polisakarida jeung polifenol dina sampel asam nukléat sabisa-bisa.

Nanging, kanyataanna, ékstraksi nganggo réagen organik mangrupikeun metode kuno.Dina kit komérsial, éfék ékstraksi bisa dihontal ngaliwatan kolom adsorption basis silika digabungkeun jeung centrifugation, Ngahindarkeun réagen organik toksik sarta ngabahayakeun nu hese dipiceun, jsb Masalahna, kayaningKit ékstraksi asam nukléat Foregene, henteu nganggo DNase / RNase sareng réagen organik toksik sapanjang operasi, gancang sareng aman, jeungpangaruh nyaétaalus(ngahaja ngomong yén éta botak, tapi kuring terang anjeun hoyong terang).

Conto 1: Ékstraksi DNA génomik ngahasilkeun jeung purity

Kit Isolasi DNA Foregene Soil (DE-05511) ngarawat conto taneuh tina sababaraha sumber, sareng jumlah sareng kamurnian DNA génomik anu dicandak dipidangkeun dina tabel ieu:
Conto 2: Tissue RNA ékstraksi ngahasilkeun jeung purity

Kit Isolasi RNA Total Sato (RE-03012) ngolah rupa-rupa conto jaringan, sareng jumlah sareng kamurnian RNA anu dicandak dipidangkeun dina tabel di handap ieu (pikeun jaringan beurit):
Sanajan kitu, ulah nganggap yén anjeun geus rengse kalayan nilai OD.Dupi anjeun gaduh ngurus titik konci I Drew pikeun anjeun di hareup?

Bewara

Molekul asam nukléat fragméntasi ogé bakal diitung dina absorbance nu.Anggap anjeun gaduh résidu DNA génomik dina RNA, nilai OD anjeun bakal kaciri pisan tinggi, tapi konsentrasi sabenerna RNA teu bisa ditangtukeun.Naha RNA anjeun Henteu écés naha aya degradasi, ku kituna urang masih peryogi metode evaluasi komprehensif pikeun masihan kaputusan anu langkung akurat, nyaéta, évaluasi integritas asam nukléat anu disebatkeun dina MIQE.