Tips pikeun Ngaronjatkeun Pamulihan lem

1. Ningkatkeun beban sampel salila éléktroforésis.

2. Paké panyangga éléktroforésis Freshly disiapkeun.

3. Nalika motong lem, coba mun motong ukur lem jeung strips pikeun ngurangan volume motong lem: teu kedah lem kalawan sababaraha fragmen Tujuan, disebutkeun eta bakal mangaruhan laju recovery.

4. Sanggeus ngalembereh dua atawa leuwih lem, make tube a euweuh urusan sabaraha badag polumeu sarta mindahkeun ka kolom sarua.

5. Leyuran ditambahkeun dina sol bisa jadi leuwih saeutik, nu leuwih kondusif pikeun beungkeutan DNA kana mémbran, tapi umumna teu ngaleuwihan 750ul.

6. Konci pikeun recovery gél nyaéta pikeun ngabeungkeut DNA kana kolom ngaliwatan konsentrasi uyah, kaasaman (muatan) jeung hydrophobicity leyuran dina kolom.Ku alatan éta, lamun pH panyangga éléktroforésis teuing tinggi, 10ul (pH 5.0, 3mol/L NaAC) bisa ditambahkeun kana sol;Dina raraga hadé intercept molekul DNA dina mémbran, 30% isopropanol bisa ditambahkeun kana panas kana cairan sanggeus ngabubarkeun lem.

7. Sateuacan nambahkeun eluent, ninggalkeun kolom dina suhu kamar pikeun sababaraha menit (kira 10 menit) pikeun pinuh menguap étanol.

8. Tungtungna, tambahkeun kirang eluent pikeun ngaleutikan volume recovery.Sacara umum, 30-50μl eluent dipaké pikeun élution (teu saeutik teuing, disebutkeun eta moal bisa baseuh mémbran, nu teu kondusif pikeun elution);titik élusi aya di tengah mémbran, pikeun pinuh elute DNA kabeungkeut mémbran.

9. Saatos nambahkeun eluent nu, éta bisa eluted dina cai mandi 55 derajat pikeun 5 menit atawa disimpen dina cai mandi 50 derajat pikeun leuwih ti 10 menit, atawa disegel ku parafilm dina 4 derajat sapeuting, lajeng centrifuged pikeun recovery poé saterusna, pangaruh anu alus.

10.Tambahkeun eluate centrifuged deui kana kolom adsorption na centrifuge deui.

Métode sareng prosedur lengkep pikeun pamulihan produk PCR

1. Daur ulang karét biasa

Lamun hayang cageur lem, éta pangalusna ngagunakeun kit, nu merenah tur boga laju recovery rada luhur.Lamun bener kudu cageur eta sacara manual, Anjeun bisa nambah 3 kali volume TE sanggeus motong lem.Sanggeus lebur dina cai mandi, fénol, fénol/kloroform diekstrak bersih, sarta étanol diendapkeun.Éta pisan.

2. recovery DNA tina titik lebur low gél

Purifikasi fragmen DNA Tambahkeun TE (10 mmol/l Tris-HCl pH8.0, 0.1 mmol/l EDTA) sarua jeung volume gél, sarta nempatkeun dina mandi cai 65 ° C salila 5 menit ngabubarkeun gél sagemblengna.

Saatos éta dibawa ka suhu kamar, jumlah sarua fénol (jenuh TE, TE ieu disegel dina lapisan luhur, sarta lapisan handap fénol dihapus) ditambahkeun, sarta campuran ieu gently dicampurkeun (henteu perlu campur aduk), sarta centrifuged dina 12.000 rpm salila 3 menit.Ngulang 1-2 kali.

Candak supernatant, tambahkeun 0,1 volume 3mol/L natrium asétat (pH 5,2) jeung 2,5 kali volume étanol mutlak pikeun ngalaksanakeun présipitasi étanol.Leyurkeun DNA anu dimurnikeun kalayan jumlah TE anu pas, ukur eusina, sareng nyiapkeun kanggo dianggo (éta tiasa dianggo pikeun analisis struktur gen target, persiapan usik, jsb.).

3. recovery PCR kalawan spésifisitas amplifikasi alus

Upami spésifisitas amplifikasi PCR saé, éta ngan ukur purifikasi sareng pamulihan produk PCR saderhana.Anjeun tiasa nambahkeun 50ug/ml proteinase K kana produk PCR, 37 derajat pikeun 1h, ékstrak sakali kalawan fénol / kloroform, ékstrak sakali kalawan kloroform, sarta nambahkeun 0,1 volume supernatant nu.Natrium asétat pulih ku présipitasi kalayan 2,5 jilid étanol mutlak.

Produk patali:

https://www.foreivd.com/pcr-purification-kit-2-product/

https://www.foreivd.com/blood-superdirecttm-pcr-kit-edta-product/