Transkripase tibalik tradisional teu tiasa toleran suhu anu luhur (suhu optimal pikeun kagiatan MMLV nyaéta 37-50 ° C, sareng AMV nyaéta 42-60 ° C).RNA virus nu leuwih kompleks teu bisa éféktif ditranskripsi balik kana cDNA dina suhu low, hasilna efisiensi deteksi ngurangan.RT-qPCR tradisional umumna merlukeun partisipasi dua énzim konci (reverse transcriptase jeung DNA polymerase), nu ngajadikeun eta teu mungkin keur simplify operasi sistem réaksi jeung ngurangan biaya.Di dieu urang bakal ngenalkeun dua transkripase sabalikna tahan suhu luhur, TtH sareng RevTaq.Dua énzim ieu ogé mibanda fungsi DNA polimérase, ku kituna disebut énzim bifungsi.

TtH DNA polimérase

Anjeun pasti pernah ngadéngé ngeunaan TtH, nu asalna tina baktéri thermophilic Thermus thermophilus HB8.Dina ayana kation divalen sapertos Mg2+, éta gaduh kagiatan DNA polimérase.Hal ieu loba dipaké dina réaksi PCR kawas énzim Taq, tapi mibanda résistansi panas leuwih luhur batan énzim Taq, jadi eta oge boga pangaruh hadé dina PCR kalawan citakan eusi GC tinggi.

· Enzim ieu dina dasarna teu mibanda aktivitas exonuclease 3′→5′ jeung aktivitas exonuclease 5′→3′, jadi bisa ogé dipaké pikeun sequencing didéoxy.

· Énzim ieu gaduh kagiatan RTase.Dina ayana Mn2+, kagiatan RTase bakal ditingkatkeun.Nganggo fitur ieu, éta tiasa dianggo pikeun ngalakukeun réaksi transkripsi sabalikna sareng réaksi PCR dina tabung anu sami, nyaéta, hiji-léngkah RT-PCR.Nanging, ku ayana Mn2+, akurasi RT-PCR henteu luhur.Kagiatan RT teu aya hubunganana sareng kagiatan rnaase H.

· ngaronjat aktivitas Tth-DNA polimérase (pH9, optimum +55℃～+70℃, maksimum +95℃) overcomes masalah disababkeun ku RNA struktur sekundér.cDNA nu dihasilkeun bisa diamplifikasi ku PCR jeung énzim nu sarua ku ayana ion Mg2+.

· Kamampuhan polimérase Tth-DNA pikeun ngalakukeun transkripsi sabalikna sareng amplifikasi DNA dina suhu anu luhur ngajadikeun énzim ieu mangpaat pikeun kuantitatif RT-PCR, kloning, sareng analisis éksprési gen RNA sélular sareng virus.
· Tth-DNA polymerase dipaké pikeun RT-PCR pikeun ngagedékeun RNA nepi ka 1kb.

Fitur sarta kaunggulan

Tth DNA polimerase:

• Pastikeun ukuran produk réaksi ranté polimérase (PCR) anu dioptimalkeun, sahenteuna 1000 bp dina réaksi RT-PCR

• Narima dirobah deoxyribonucleoside triphosphate salaku substrat

• Teu patali jeung aktivitas RNase H

• Mibanda stabilitas termal tinggi pikeun nungkulan masalah, biasana patali jeung struktur sekundér tinggi hadir dina RNA

RevTaq RT-PCR DNA polimérase

A polimérase DNA tahan panas kalayan aktivitas transkripse balik

RevTaq-RT-PCR-DNA polimérase mangrupa rékayasa, kacida tahan panas, énzim dual-fungsi kalawan reverse transcriptase jeung aktivitas DNA polymerase diala ngaliwatan évolusi diarahkeun jeung jieunan.

· Satengah-umur RevTaq RT-PCR DNA polymerase dina 95°C leuwih ti 40 menit.

· RevTaq RT-PCR DNA polymerase ngamungkinkeun transkripsi ngabalikeun suhu luhur langsung tina citakan RNA, sareng léngkah transkripsi sabalikna tiasa diulang sababaraha kali pikeun ngahasilkeun langkung seueur témplat cDNA.

· RevTaq RT-PCR DNA polimérase ngamungkinkeun "enol-step" RT-PCR (euweuh isothermal reverse transcription step), sabab dina siklik PCR extension hambalan, transkripsi sabalikna sarta amplifikasi DNA lumangsung sakaligus.Ieu ogé ngamajukeun réaksi transkripsi sabalikna dina suhu anu luhur, ku kituna ngaminimalkeun masalah anu aya dina ngalebur struktur sekundér anu kuat dina RNA dina suhu anu luhur.

· Kusabab rumus hot-start basis aptamer, RevTaq RT-PCR DNA polymerase bakal ngahasilkeun hasil anu langkung saé nalika suhu annealing sareng extension langkung luhur tibatan 57 ° C.

· Kusabab énzim tahan panas, disarankeun pikeun ngarancang primer sareng panyilidikan kalayan titik lebur anu luhur pisan (>60°C).

· Disarankeun pikeun ngaoptimalkeun hawa tina annealing / extension hambalan ngaliwatan gradién suhu salila prosés setelan réaksi.

· Nu leuwih luhur suhu, nu leuwih luhur spésifisitas PCR.Siklus transkripsi sabalikna biasana dipigawé dina suhu nu leuwih luhur batan siklus PCR, sabab DNA Primer: RNA Citakan hibridisasi biasana miboga titik lebur nu leuwih luhur batan DNA Primer: cDNA Citakan duplex.

· RevTaq RT-PCR DNA polymerase dirékayasa sacara genetik sareng dioptimalkeun, sareng ukuran amplikon antara 60-300 bp.

RevTaq RT-PCR DNA polimérase wates deteksi ngahontal 4 salinan /

Sistim réaksi dioptimalkeun (ngadegna primers titik lebur tinggi) ditémbongkeun dina gambar.RevTaq RT-PCR DNA polimérase-disetir RT-PCR nembongkeun sensitipitas hadé ti TaqPath 1-hambalan RT-qPCR campuran master, sarta deteksi handap gradién éncér sampel.

Kauntungan langkung:

Pungsi ngamimitian gancang → Lengkah denaturasi termal awal bisa dilewatan.

Hot-start aptamer formula → Nyadiakeun 100% aktivitas énzim geuwat sarta nyegah amplifikasi non-spésifik dina suhu low (<57°C).

Fungsi pembelahan → Léngkah ékstraksi RNA dileungitkeun, sabab RevTaq RT-PCR DNA polimérase ogé tiasa ngolah sampel réaksi kasar.Bisa langsung ngancurkeun mémbran sél eukariota, baktéri jeung virus dina siklus RT-PCR panas.

Tingkat bahan baku IVD → standar kualitas luhur sareng harga anu kompetitif pisan