Naon vaksin mRNA
Vaksin mRNA mindahkeun RNA kana sél awak pikeun nganyatakeun sareng ngahasilkeun antigén protéin saatos modifikasi anu relevan sacara in vitro, sahingga nyababkeun awak ngahasilkeun réspon imun ngalawan antigén, ku kituna ningkatkeun kapasitas imun awak.[1,3].
Gambar 1: Diagram skéma tina pangaruh suntikan langsung vaksin mRNA [2]
Klasifikasi vaksin mRNA
Vaksin mRNA dibagi jadi dua jenis:nonreplicatingmRNA jeungtimer amplifyingmRNA: mRNA ngagedekeun diri henteu ngan ukur ngodekeun antigen target, tapi ogé ngodekeun réplikasi anu ngamungkinkeun amplifikasi RNA intrasélular sareng mékanisme ekspresi protéin.Vaksin mRNA non-replikasi ngan ukur ngodekeun antigén target sareng ngandung 5' sareng 3' wilayah anu teu ditarjamahkeun (UTR).Aranjeunna nyayogikeun stimulasi komprehensif pikeun adaptasi sareng kekebalan bawaan, nyaéta ekspresi antigen in situ sareng pangiriman sinyal bahaya, sareng gaduh aplikasi di handap ieu.[2,3]
● Tiasa nyadiakeun stimulasi komprehensif ngeunaan adaptability sarta kekebalan leuleuy, nyaéta ekspresi antigen di situ jeung transmisi sinyal bahaya
●Bisa nyababkeun réspon imun "seimbang", kalebet éféktor humoral sareng sélular sareng mémori imun
●Tiasa ngagabungkeun antigén béda tanpa ngaronjatkeun pajeulitna rumusan vaksin
●Perbaikan kontinyu poténsi imun bisa dihontal ngaliwatan vaksinasi terus-terusan, sarta euweuh atawa saeutik respon imun ka pamawa.
●Vaksin mRNA stabil panas tiasa nyederhanakeun transportasi sareng neundeun vaksin
Gambar 2: Diagram skematis vaksin mRNA sareng mékanisme ekspresi antigénna [4]
Fitur vaksin mRNA
Dibandingkeun sareng vaksin tradisional, vaksin mRNA gaduh prosés produksi anu sederhana, laju pangembangan gancang, henteu peryogi kultur sél, sareng béaya rendah.Dibandingkeun sareng vaksin DNA, vaksin mRNA henteu kedah asup kana inti sareng henteu aya résiko integrasi kana génom host.Satengah-umur tiasa disaluyukeun ku modifikasi.
Tabél 1: Kaunggulan jeung kalemahan vaksin mRNA
|
| Kauntungan | Kakurangan |
| vaksin mRNA | Panaliti sareng pamekaran gancang, produksi vaksin ngan ukur 40 dinten | Micu réspon imun anu teu perlu
|
| instability mRNA dina kaayaan fisiologis, gampang nguraikeun | Moal ngahijikeun kana génom pikeun ngahindarkeun kamungkinan mutasi terapi
| |
| Henteu peryogi sinyal lokalisasi nuklir, transkripsi | Éféktivitas nuklir kaamanan tetep kedah diverifikasi
|
Gambar 3: Bagan alur produksi sareng persiapan vaksin mRNA [4]
Kit Isolasi RNA Viral Foregene
RT-qPCR Gampang (Salah Lengkah)
Ningkatkeun strategi pikeun persiapan vaksin mRNA
Alatan stabilitas goréng mRNA sorangan, gampang degradasi ku nucleases dina jaringan, efisiensi asupna sél low, sarta efisiensi tarjamah low, defects ieu ngawatesan aplikasi vaksin mRNA.Efisiensi tarjamahan ogé maénkeun peran anu penting pisan.Kandaraan pangiriman bisa dibagi jadi véktor viral jeung véktor non-viral (kaasup liposom, non-liposom, virus, nanopartikel, jsb).Ku alatan éta, ukuran perbaikan relevan diperlukeun.Ieu mangrupikeun strategi perbaikan farmakologis pikeun persiapan mRNA[2]
1 Synthesize cap analogs or use capping enzymes to stabilizem mRNA and increase protein translation by binding to eukariot translasi initiation factor 4E (EIF4E)
2 Saluyukeun elemen dina 5′-untranslated region (UTR) jeung 3′-UTR pikeun nyaimbangkeun mRNA jeung ningkatkeun translasi protéin.
3 Nambahkeun buntut Poly(A) tiasa nyaimbangkeun mRNA sareng ningkatkeun tarjamahan protéin
4 Nukléosida anu dirobih pikeun ngirangan aktivasina imun bawaan sareng ningkatkeun tarjamahan
5 Perlakuan sareng RNase III sareng pemurnian kromatografi cair protéin gancang (FPLC) tiasa ngirangan aktivasina imun sareng ningkatkeun tarjamahan.
6 Optimalkeun runtuyan atawa kodon pikeun ngaronjatkeun tarjamahan
7 Co-pangiriman faktor inisiasi tarjamahan jeung métode séjénna pikeun ngarobah tarjamahan jeung immunogenicity
Gambar 4: Produksi mRNA transkripsi in vitro (IVT) sareng prosés perakitan [5]
Persiapan skala ageung DNA plasmid
Pemurnian DNA plasmid utamana ngaleungitkeun kontaminan sapertos RNA, éndotoksin DNA bunderan kabuka, protéin inang sareng asam nukléat inang, sareng biasana ngarobih plasmid rékombinan janten E. coli.E. coli ngalaman fermentasi dénsitas luhur, teras pamisahan padet-cair, sareng kumpulan E. coli.E. coli ieu lajeng subjected ka lysis basa, centrifugal separation solid-cair jeung klarifikasi microfiltration sanggeus lysis, ultrafiltration jeung konsentrasi sanggeus klarifikasi, lajeng purifikasi kromatografi.
Purifikasi DNA plasmid:
Foregene Umum Plasmid Mini Kit
【1】苗鹤凡, 郭勇, 江新香.mRNA疫苗研究进展及挑战[J].免疫学杂志, 2016 (05): 446-449.
【2】Pardi N, Hogan MJ, Porter FW, et al.Vaksin mRNA - jaman anyar dina vaccinology[J].Ulasan Alam Papanggihan Narkoba, 2018.
【3】Kramps T., Elbers K. (2017) Bubuka pikeun RNA Vaksin.Dina: Kramps T., Elbers K. (eds) RNA Vaksin.Métode dina Biologi Molekul, vol 1499. Humana Pencét, New York, NY.
【4】Maruggi G , Zhang C , Li J , et al.mRNA salaku Téknologi Transformatif pikeun Pangembangan Vaksin pikeun Ngadalikeun Panyakit Inféksi [J].Terapi Molekul, 2019.
【5】Sergio Linares-Fernández, Céline Lacroix, , Nyusun Vaksin mRNA pikeun Nyaimbangkeun Tanggapan Kekebalan Bawaan/Adaptif, Tren dina Kedokteran Molekul, Jilid 26, Edisi 3,2020, Kaca 311-323.
waktos pos: Aug-05-2021
