RNase mangrupa kecap sénsitip anu loba siswa anu mindeng ngalakukeun ékstraksi RNA ékspérimén teu hayang ngadangu.Sapinuhna pakarang, RNA nu tungtungna sasari jeung réagen kacida toksik fénol jeung kloroform ieu didegradasi.Kuring teu reconciled!!!Dinten ayeuna, hayu urang tingali asal-usul Rnase anu kasohor.

Ribonuclease (RNase), atawa RNase, nyaéta nukléase nu bisa ngahidrolisis RNA jadi molekul leutik.RNase, salaku protéin molekul leutik, teu biasa stabil .Suhu luhur konvensional sareng sterilisasi uap tekanan tinggi sareng sambetan protéin henteu tiasa nganonaktipkeun lengkep.Stabilitas RNase utamana asalna tina beungkeut disulfida dina struktur.Contona, RNase nu ilahar dipaké pankréas bovine ngan boga 124 asam amino, tapi ngandung 4 beungkeut disulfida.Beungkeut walirang sareng beungkeut disulfida masihan RNase kalayan stabilitas termal anu saé.Sajaba ti éta, rnase ngabogaan beurat molekul relatif leutik sarta bisa gancang mulangkeun konformasi aslina dina loba kasus.

Salian stabil pisan,RNases aya dimana-mana di laboratorium .RNase mangrupikeun mékanisme pertahanan biologis.Pikeun sél, RNA exogenous mindeng fatal.Dibandingkeun sareng DNA eksogen, RNA eksogen sering langkung bahaya.RNA senang ditranskripsi jeung ditarjamahkeun, jadi ampir kabéh organisme geus mekar RNases pikeun membela ngalawan invasi RNA eksogen.Ku alatan éta, sél baktéri anu dibudidayakan di laboratorium sareng anjeun anu ékstrak RNA ngaluarkeun aroma RNase.Cairan awak manusa (ciduh, cimata, jsb.) ngandung jumlah RNase anu ageung, janten ulah ceurik nalika RNA didegradasi.Beuki ceurik, beuki parah degradasi RNA!!Adina Daiyu henteu cocog pikeun ékstraksi RNA!

Sajaba ti éta, kulit hipu anjeun ogé ngandung loba RNase, sarta spidol, pipettes, panto kulkas, sarta handles panto nu geus keuna ku kulit ogé ngandung RNase.

Kalayan seueur rambling, hayu urang tingali kumaha cara nungkulan RNases.

Hal kahiji anu dipikiran ku sadayana nalika ngaleungitkeun RNA nyaétaDEPC(dietil pirokarbonat).DEPC utamana denatures protéin ku ngagabungkeun jeung cingcin imidazole tina histidine grup aktif RNase, kukituna inhibiting aktivitas énzim.0,1% DEPC tiasa gaduh pangaruh panyabutan anu langkung saé dina Rnase, tapi urang kedah perhatikeun yén DEPC mangrupikeun karsinogén anu dipikanyaho, janten perhatian khusus kedah dibayar nalika ngagunakeunana.

Pikeun RNase, urang kedah ngamimitian tina dua aspék,kahiji nyaéta ngahambat aktivitas RNase endogenous

Réagen ékstraksi RNA konvensional sapertos guanidine isothiocyanate sareng DTT anu aya dina Trizol tiasa muka beungkeut disulfida RNase, tapi masih aya sababaraha RNases, khususna dina conto jaringan, janten perhatikeun suhu anu rendah.

1.Geura teuleumkeun sampel jaringan dina nitrogén cair sanggeus dicokot kaluar, atawa dina leyuran pelestarian RNA komérsial.

2.Saatos ékstrak RNA tina sampel sél, tambahkeun kana leyuran lisis sareng lisekeun kana kotak és.

3. Hadé pisan mun éta ngagunakeun nitrogén cair pikeun grinding nalika sampel jaringan homogen.Lamun make hiji homogenizer listrik tanpa nitrogén cair, perhatikeun pinuh pre-cooling adaptor homogenate.

Anu kadua nyaéta DNase éksogén

1.Janten pinuh pakarang, make jas lab, make masker, sarta pastikeun pikeun ngagem sapasang sarung anyar (ulah jadi hemat!! Ieu kudu dicatet yén Trizol super corrosive, sarta eta oge pohara kuat ngaliwatan sarung, jadi ulah netes kana leungeun anjeun).

2.Sadaya tip pipette anu dianggo, tabung EP, tabung PCR sareng alat-alat sanésna kedah dirawat de-RNase.Ieu bisa soaked dina 0,1% DEPC lajeng pressurized dina tekanan tinggi.Nengetan operasi dina tiung haseup.Tyrants lokal bisa langsung meuli consumables pikeun nyoplokkeun énzim.

PS: Hayu atuh ngabejaan Anjeun metoda puguh.Sanajan suhu luhur sarta tekanan tinggi teu bisa sagemblengna nyabut RNase, eta bakal miceun sabagian badag tina eta.2 kali suhu luhur sareng tekanan tinggi ngagaduhan pangaruh anu saé, sareng ékstraksi RNA ngagaduhan sakedik pangaruh.

3.Alkohol tiasa denaturasi protéin,jadi tabel ékstraksi RNA bisa ngusap kalawan alkohol 75%. , sareng sarung tangan ogé tiasa disemprot ku alkohol.

4.Solusi ngabubarkeun RNA ahir sareng tabung centrifuge ogé kedah dirawat de-RNase.Cai DEPC mangrupikeun solusi ngabubarkeun RNA anu biasa dianggo.Hayu urang ngobrol ngeunaan metode persiapan cai DEPC anu leres (inget pikeun ngarangkep deui DEPC komérsial nalika anjeun ngagaleuh)

Tambahkeun DEPC kana cai ultrapure dina 1:1000, ngocok ogé, hayu nangtung sapeuting dina 37 ° C, sarta sterilize dina 121 ° C dina suhu luhur sarta tekanan tinggi pikeun 15 menit.cai DEPC bisa disimpen dina -20 ° C dina 1ml aliquots.

Tungtungna, pikeun nyimpulkeun: suhu rendah mangrupikeun konci, barang-barang anu tiasa diurus saé, bersenjata lengkep sareng kirang ngobrol!

Nya, éta kanggo strategi ayeuna.Abdi ngarepkeun anjeun sadayana konsentrasi RNA sareng kamurnian anu anjeun nyarios.Duanana A260 / A280 nyaéta 2.0!!!

Tangtu, lamun make akit ékstraksi RNA operasi suhu kamar, Anjeun bisa jadi teu sapatemon troubles luhur.

Operasi dina suhu kamar, tanpa nambahkeun DNase, extracts total RNA tina sél dina 11 menit, sarta extracts total RNA tina jaringan sato atawa tutuwuhan dina 30 menit.

Pikeun conto percobaan, mangga ngahubungan:overseas@foregene.com

Produk patali:

https://www.foreivd.com/cell-total-rna-isolation-kit-product/

https://www.foreivd.com/animal-total-rna-isolation-kit-product/

https://www.foreivd.com/plant-total-rna/