Kami parantos ngalaman produsén.Wining mayoritas dina sertifikasi krusial pasar na pikeun Big discounting Cina High Sensitipitas Hiji-Lengkah Probe Rt-QpcrKit V2, Kualitas mangrupikeun kahirupan pabrik, Fokus kana paménta pelanggan mangrupikeun sumber kasalametan sareng pamekaran perusahaan, Urang taat kana kajujuran sareng sikep kerja iman anu saé, ngarepkeun kadatangan anjeun!
Kami parantos ngalaman produsén.Wining mayoritas di certifications krusial pasar na pikeunCina Taq DNA Polimérase, Qpcr, Pausahaan kami janji: harga lumrah, waktu produksi pondok tur nyugemakeun layanan sanggeus-jualan, urang ogé ngabagéakeun anjeun nganjang ka pabrik urang iraha wae rék.Hayang ayeuna urang gaduh bisnis anu pikaresepeun sareng panjang babarengan!!!

Katerangan

Kit ieu nganggo sistem panyangga lysis unik anu tiasa gancang ngaleupaskeun RNA tina sampel sél berbudaya pikeun réaksi RT-qPCR, ku kituna ngaleungitkeun prosés purifikasi RNA anu nyéépkeun waktos sareng susah.Témplat RNA tiasa didapet dina ngan 7 menit.Réagen 5×Direct RT Mix sareng 2×Direct qPCR Mix-SYBR anu disayogikeun ku kit tiasa gancang sareng efektif kéngingkeun hasil PCR kuantitatif sacara real-time.

5 × Langsung RT Campur jeung 2 × Langsung qPCR Campur-SYBR boga kasabaran inhibitor kuat, sarta lysate tina sampel bisa dipaké salaku template pikeun RT-qPCR langsung.Kit ieu ngandung RNA high-afinity Foregene reverse transcriptase, sareng Hot D-Taq DNA polymerase, dNTPs, MgCl₂, panyangga réaksi, pangoptimal PCR sareng penstabil.

spésifikasi

200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns

komponén Kit

Fitur & kauntungan

■ Basajan tur éféktif : kalawan téhnologi Cell Direct RT, sampel RNA bisa diala dina ngan 7 menit.

■ Paménta sampel leutik, sahandapeun 10 sél bisa diuji.

■ throughput tinggi: eta bisa gancang ngadeteksi RNA dina sél berbudaya dina 384, 96, 24, 12, 6-sumur pelat.

■ DNA pamupus bisa gancang nyabut génom dileupaskeun, greatly ngurangan dampak dina hasil eksperimen saterusna.

■ Sistim RT na qPCR dioptimalkeun ngajadikeun dua-hambalan RT-PCR transkripsi sabalikna leuwih efisien sarta PCR leuwih spésifik, sarta leuwih tahan ka sambetan réaksi RT-qPCR.

Aplikasi kit

Lingkup aplikasi: sél berbudaya.

- RNA dileupaskeun ku lysis sampel: ngan lumaku pikeun RT-qPCR template kit ieu.

- Kit tiasa dianggo pikeun tujuan ieu: analisa éksprési gén, verifikasi pangaruh silencing gén anu dimédiasi siRNA, saringan ubar, jsb.

Diagram

Panyimpenan sarta hirup rak

Bagian I tina kit ieu kudu disimpen dina 4 ℃;Bagian II kudu disimpen dina -20 ℃.

Foregene Protease Plus II kudu disimpen dina 4 ℃, ulah freeze dina -20 ℃.

Réagen 2×Direct qPCR Campur-SYBR kudu disimpen dina -20 ℃ di nu poek;lamun dipaké remen, éta ogé bisa disimpen dina 4 ℃ pikeun neundeun jangka pondok (make up dina 10 days) .We geus ngalaman produsén.Wining mayoritas di certifications krusial pasar na keur Big discounting Cina High Sensitipitas Hiji-Lengkah usik Rt-Qpcr Kit V2, Quality nyaeta pabrik 'hirup , Pokus kana customer' paménta mangrupa sumber survival parusahaan jeung ngembangkeun, Urang taat kana kajujuran jeung iman alus dangong digawé, pilari maju ka datangna anjeun!
diskon badagCina Taq DNA Polimérase, Qpcr, Pausahaan kami janji: harga lumrah, waktu produksi pondok tur nyugemakeun layanan sanggeus-jualan, kami ogé ngabagéakeun anjeun nganjang ka pabrik urang iraha wae rék.Hayang ayeuna urang gaduh bisnis anu pikaresepeun sareng panjang babarengan!!!

QuickEasyTM Cell Direct RT-qPCR Kit -Taqman

Cat.No.DRT-01021/01022

Pikeun sél langsung RT-qPCR ngagunakeun ≤ 1000.000 sél

bubuka produk

Produk ieu ngagunakeun sistem panyangga lysis unik pikeun gancang ngaleupaskeun RNA tina sampel sél berbudaya pikeun réaksi RT-qPCR, ngaleungitkeun prosés purifikasi RNA waktu-consuming tur laborious, sarta ngan 7 menit pikeun ménta template RNA diperlukeun, kalawan 5 × Direct RT Campuran, 2 × Direct qPCR Campur-Taqman disadiakeun ku kit nu bisa gancang jeung éfisién hasil kuantitatif real-time PCR kuantitatif.

5 × langsung RT Campur jeung 2 × langsung qPCR Campur-Taqman boga kasabaran inhibitor kuat tur bisa ngalakukeun ngabalikeun efisien sarta Gedekeun husus ngagunakeun lysate sampel pikeun diukur salaku citakan.Reagen ngandung Foregene Reverse Transcriptase, Hot D-Taq DNA Polymerase, dNTPs, MgCl₂, Réaksi panyangga, PCR Optimizer na Stabilizer, nu bisa dipaké kalawan lysis panyangga pikeun gancang sarta gampang ngadeteksi sampel, sarta boga ciri sensitipitas tinggi, spésifisitas jeung stabilitas.

fitur produk

Téknologi Cell Direct RT anu sederhana sareng efektif anu peryogi sakedik 7 menit kanggo nyandak conto RNA.

Sarat sampel anu leutik, sarta minimum 10 sél berbudaya bisa dipaké pikeun experimentation.

throughput tinggi pikeun akuisisi RNA gancang sél berbudaya kayaning 384, 96, 24, 12, jeung 6-sumur pelat.

DNA Eraser tiasa gancang ngahapus génom anu dileupaskeun, ngirangan pisan dampak kana hasil ékspérimén salajengna.

Sistem RT sareng qPCR anu dioptimalkeun ngaktifkeun dua-léngkah RT-PCR kalayan transkripsi sabalikna, spésifisitas, sareng kasabaran inhibitor réaksi RT-qPCR anu langkung éfisién.

Aplikasi kit

Lingkup aplikasi: Sél kultur.

Sampel lysis diinterpretasi RNA: dipaké ukur salaku dua-hambalan RT-qPCR template.

Kit tiasa dianggo pikeun tujuan ieu: analisis ekspresi pangaturan gén, uji alél, saringan ubar, jsb.

watesan Kit

Fragmén diamplifikasi ≤ 300 bp.

Kit anu dipaké pikeun sél anyar kultur.

kontrol kualitas produk

Numutkeun kana Sistem Manajemén Kualitas Total FOREGENE, unggal angkatan séri séri Cell Direct RT-qPCR diuji sacara ketat sababaraha kali pikeun mastikeun réliabilitas sareng stabilitas kualitas unggal angkatan kit.

eusi kit

*:Cell Lysis, 5×Direct RT Mix, 2× Direct qPCR Mix-Taqman tiasa dipésér nyalira, detil disayogikeun dina Appendix 1 (Page 13).

Kaayaan neundeun

1. Kaayaan Pangiriman

Sakabeh proses transportasi kotak és pack suhu low, pikeun mastikeun yén kit aya dina kaayaan <4 °C.

2. Kaayaan gudang

Simpen bagian I dina 4 ° C sareng Bagian II dina -20 ° C.

Foregene Protease Plus II kedah disimpen dina suhu 4 ° C, henteu beku dina -20 ° C.

Réagen 2 × Langsung qPCR Campur-Taqman disimpen dina -20 ° C, atawa dina 4 ° C pikeun pamakéan jangka pondok lamun dipaké remen (dina 10 poé).

Inpo komponén kit

Buffer CL: Nyadiakeun lingkungan anu diperlukeun pikeun réaksi lisis sél.

panyangga ST: Terminates zat aktif dina lysate nu ulah épék on RT saterusna.

DNA pamupus: DNA remover, pangaruh miceun génom dina percobaan saterusna.

5× Direct RT Mix: Ngandung afinitas RNA tinggi Foregene Reverse Transcriptase, RNase Inhibitor, dNTPs, stabilizers, enhancers, optimizers, and reverse transcription primers for alignment optimal (Random Primer, Oligo(dT)₁₈Primer).

Foregene Protease Plus II: Dina kontéks panyangga lisis, sél dilisiskeun pikeun ngaleupaskeun asam nukléat.

2× Direct qPCR Mix-Taqman: réagen ieu ngandung Hot D-Taq DNA Polimérase, dNTPs, MgCl₂, panyangga réaksi, pangoptimal PCR, sareng penstabil.

20 × ROX Rujukan Dye: Umumna dipaké dina Real Time instrumen amplifikasi PCR of ABI, Stratagene jeung pausahaan séjén, éta dipaké pikeun nyaluyukeun bédana antara tabung PCR na tabung disababkeun ku kasalahan dosing PCR.Konsentrasi Dye Rujukan 20 × ROX anu dipikabutuh pikeun instrumen anu béda-béda béda, sareng pangguna tiasa nambihanana dumasar kana konsentrasi alat anu disarankeun.

RNase-Free ddH₂O: RNase bébas sterilized cai ultra murni pikeun dua-hambalan RT-qPCR réaksi.

Tindakan pancegahan:(Pastikeun maca pancegahan sacara saksama sateuacan nganggo kit)

Nengetan métode operasi percobaan pikeun nyegah kontaminasi silang antara sampel.

Nengetan kabersihan lingkungan ékspérimén sareng alat-alat pikeun ngahindarkeun kontaminasi RNase sareng degradasi RNA.

Candak sampel sél seger atawa well-dilestarikan sarta pernah make ulang sampel sél freeze-thawed.

5× Langsung qPCR Campur, 2× Langsung qPCR Campur-Taqman kedah ulah aya-terusan freeze-ngalembereh, disebutkeun eta bakal mangaruhan transkripsi sabalikna sarta efisiensi PCR.

Nyiapkeunjatahsateuacanoperasi

Pastikeun maca parentah taliti saméméh ngagunakeun kit ieu.The Cell Direct RT-qPCR Kit téh basajan, merenah, tur gancang mun beroperasi, sarta parentah nyadiakeun informasi lengkep ngeunaan sakabéh kit jeung kumaha carana make eta leres.Mangga nyiapkeun bahan jeung alat ékspérimén diperlukeun saméméh pamakéan.

Bahan sareng alat ékspérimén

◆ Sél kultur.

◆ 1,5 ml atawa 2 ml, RNase-/DNase-Free tube centrifuge, RNase-/DNase-Free tip, 0,2 ml tube qPCR steril.

◆ mesin qPCR, pipet, centrifuge tabletop (≥13.400×g) (gumantung kana kabutuhan ékspérimén), jsb.

Kasalametan

◆ Produk ieu kanggo tujuan panalungtikan ilmiah wungkul, punten ulah dianggo pikeun tujuan farmasi, klinis, kadaharan sareng kosmetik.

◆ Lamun maké bahan kimia, maké baju lab luyu, sarung tangan, kacamata pelindung, jsb.

Operasipituduh

Sistem Lysis sél, sistem RT, sareng bungkus suplement solusi réaksi qPCR tiasa dipésér nyalira, pikeun detil dina Appendix 1 (KACANA 13).

pituduh operasi

A: Sampel RNA release

1.Sél anu pretreated: Ngumbah piring kultur sél jeung tiis PBS, teras lyse sél (10-10⁶), 10⁶ ti jumlah sél, dianjurkeun Foregene sél hiji RNA Isolasi Kit Total (DE-03111) atanapi Sato Jumlah RNA Isolasi Kit (DE-03011) pikeun ékstraksi RNA jeung purifikasi.

1.1.Sél adherent (24- well plate salaku conto)

1.1.1.Tangtukeun jumlah sél dina unggal sumur, tangtukeun jumlah sél nyaéta 1 × 10⁵, sarta ngagunakeun pipette pikeun miceun medium budaya tina piring budaya.

1.1.2.Tambahkan 200 μl 1 × PBS yang sudah dingin ke masing-masing sumur.Ulah pipet sababaraha kali tur cabut PBS tina sumur.Dengdekkeun piring jeung cabut saloba PBS-gancang.Teraskeun kana léngkah 2.

1.1.3.piring budaya sél béda atawa tabel angka rujukan 1-1 dina piring budaya sél ditambahkeun precooled 1 × PBS pikeun cuci sél.

Tabél1-1: Dosis PBS pikeun jumlah sél anu béda

Catetan:Pikeun mastikeun sél adherent teguh,jumlah badag leungitna sél dihindari nalika ngumbah.

1.2.Sél gantung atawa sél adherent dibudidayakan dina pelat non-porous

1.2.1.Sél adherent dibudidayakan dina non-multi ogé pelat (sél gantung mimitian ti lengkah saterusna 1.2.2), ngumpulkeun jeung misahkeun sél nurutkeun métode kempelan sél normal, sarta nempatkeun eta dina piring budaya atawa tube centrifuge;lamun trypsinization dipaké, merlukeun centrifugation pikeun ngumpulkeun sél jeung miceun residual tripsin, ditambahkeun PBS resuspended sél kana sél individu pikeun bubarkeun sél.

1.2.2.Saatos jumlah sél diitung, sél aliquoted 1 × 10⁵ hiji ka tabung centrifuge, kumpulkeun sél ku sentrifugasi dina 1000 × g salila 10 mnt.

1.2.3.Tambahkeun 200 μl PBS kana tabung centrifuge, ulah pipet sababaraha kali, sarta langsung aspirate PBS.neruskeun lengkah 2. (Mun hese endapanana jeung sél anu resuspended deui, bisa dipigawé 1000 × g centrifuged 10 mnt sanggeus discarding supernatant nu, pellet sél lumangsungna lengkah 2)

2.Cell lysis: Cabut panyangga CL, suhu na equilibrated ka suhu kamar, DNA pamupus na Foregene Protease Ditambah II, nurutkeun tabel di handap ieu 1-2 disusun Sistim lysis: (Solusi Lysis siap dipaké).

Table1-2: beulahan persiapan sistem (Catetan: dina persiapan dina és)

3. ( 24-sumur plat sabagé conto ) Pipet 200 μl sél lysis master campuran kana unggal sumur, Tiup sababaraha kali 5-10 kali, Incubate dina suhu kamar (20-25 ℃) salila 5 mnt.

Catetan:Pikeun ngahindarkeun formasi gelembung, mangga nalika pipetting skala pipette disaluyukeun kana 200μl atanapi kirang.Sél tiasa katingali mendung saatos lisis, anu normal.

4.(24-sumur plat sabagé conto) ditambahkeun dina cair 20 μl panyangga ST (sistem lysis béda panyangga ST ditambahkeun dina jumlah ditémbongkeun dina Table 1-3), terus pipetting 5-10 kali, dina suhu kamar (20-25 ℃) ieu incubated pikeun 2 mnt.

Catetan:Ujung pipette disposed handap beungeut, mastikeun yén lysate ieu ditambahkeun,Pikeun ngahindarkeun formasi gelembung, mangga nalika pipetting skala pipette disaluyukeun kana 200μl atanapi kirang.

Tabél 1-3:Tambahkeun panyangga ST

5.Lisate dipaké pikeun percobaan RT-qPCR saterusna.Lamun percobaan saterusna teu bisa dipigawé dina waktu, mangga tetep dina és pikeun henteu leuwih ti 2hr, sarta nyimpen dina -20 ℃ atawa -80 ℃ (teu leuwih ti tilu bulan).

B: Persiapan sistem RT

1. Nyokot 5 × langsung RT Campur sarta nempatkeun eta dina mandi és, hayu eta ngalembereh alami, sarta gently gaul eta pikeun pamakéan engké;nyandak RNase-Free ddH2O sarta ngalembereh eta sarta nempatkeun eta dina mandi és pikeun pamakéan engké.Nyiapkeun sistem réaksi dina és nurutkeun Tabél 2-1 di handap.

Tabél 2-1: Persiapan sistem réaksi RT

2.After parantosan rumusan sistem, gently dicampurkeun jeung centrifuged sakeudeung dina tabel di handap ieu 2 -2 kaayaan réaksi réaksi RT.

meja 2-2: setting kaayaan Réaksi RT

3.After parantosan réaksi, produk réaksi ieu disimpen langsung dina és pikeun qPCR, mangga nempatkeun pelestarian jangka panjang -20 ℃ atawa -80 ℃.

Catetan: Alatan pamakéan template non-dimurnikeun, endapan bodas bisa muncul dina produk transkripsi sabalikna.Ieu fenomena normal.Centrifuge supernatant geuwat pikeun percobaan salajengna.

Solusi réaksi RT anu dihasilkeun ditambahkeun kana Lengkah saterusna Sistim réaksi PCR Real Time, eta disarankeun pikeun nambahkeun jumlah mimitian ti 10-30% tina sistem réaksi.

C: persiapan sistem réaksi qPCR

1.Jumlah luyu B disiapkeun dina hambalan cDNA template nurutkeun tabel di handap 3-1 pikeun nyiapkeun sistem réaksi.

Catetan: Jumlah template cDNA akun pikeun 10-30% tina sistem qPCR.Contona, dina sistem qPCR 20μl, tambahkeun 2-6 μl panyangga lisis, tapi teu leuwih ti 6 μl.

2. The optimasi kaayaan qPCR alus (suhu annealing, jsb) pikeun réaksi qPCR (The kaayaan réaksi dibikeun dina Table 3-2).

Catetan: Coba nganggo kaayaan anu dioptimalkeun pikeun réaksi qPCR pikeun kéngingkeun hasil anu langkung saé.

Tabél 3-1: Persiapan sistem réaksi PCR

1*: Konsentrasi Primer bisa disaluyukeun dina rentang 50-900 nm lamun kinerja réaksi Primer goréng.

Catetan: Sistem qPCR bisa disaluyukeun nurutkeun pangabutuh ékspérimén jeung modél cycler fluoresensi.Pikeun qPCR dina 50μl, saluyukeun dosis réagen sacara proporsional dumasar kana 20μl sistem.

2*: Pilih konsentrasi ahir luyu ROX Rujukan Dye nurutkeun fluoresensi kuantitatif cycler termal.Konsentrasi Dye Rujukan ROX anu paling pas pikeun siklus kuantitatif fluoresensi umum dipidangkeun dina tabel di handap ieu:

Méja 3-2: kaayaan réaksi qPCR disadiakeun

Catetan: Pikeun meunangkeun éfék qPCR pangalusna, gradién PCR bisa dipaké pikeun ngaoptimalkeun kaayaan réaksi pikeun template béda jeung primers béda.Kaayaan réaksi PCR rupa-rupa gumantung kana analisa fluoresensi, citakan, primer, jsb. Dina operasi husus, kaayaan réaksi optimal kudu dirancang nurutkeun kaayaan spésifik tina cycler termal kuantitatif fluoresensi, tipe template, ukuran fragmen dipikaresep, runtuyan dasar tina fragmen amplified jeung eusi GC jeung panjang primers, kaasup suhu annealing, waktu réaksi, jsb.

Prinsip desain primer PCR Waktu Nyata

Maju Primer jeung Reverse Primer

Pikeun Real Time PCR, desain primer penting pisan.Primer aya hubunganana sareng spésifisitas sareng efisiensi amplifikasi PCR, sareng tiasa dirarancang kalayan ngarujuk kana prinsip-prinsip ieu:

◆ Panjang Primer: 18-30bp.

◆ eusi GC: 40-60%.

◆ Nilai Tm: Parangkat lunak desain Primer, sapertos Primer 5, tiasa masihan nilai Tm tina primer.Nilai Tm primer hulu jeung hilir kudu sacaket mungkin.Rumus itungan Tm ogé bisa dipaké: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Nalika ngalakukeun PCR, suhu sahandapeun nilai Tm primer 5 °C umumna dipilih salaku suhu annealing (kenaikan suhu annealing anu saluyu tiasa ningkatkeun spésifisitas réaksi PCR).

◆ Primer sareng produk PCR:

◆ Desain Primer produk amplifikasi PCR panjangna preferably 100-150bp.

◆ Primes desain di wewengkon struktural sekundér template kudu dihindari saloba mungkin.

◆ Hindarkeun kabentukna 2 atawa leuwih basa pelengkap antara tungtung 3′ primers hulu jeung hilir.

◆ Primer 3′ terminal base teu bisa hadir kalawan 3 tambahan berturut-turut G atawa C.

◆ Primer sorangan teu bisa boga struktur pelengkap, disebutkeun struktur hairpin bakal kabentuk, mangaruhan amplifikasi PCR.

◆ ATCG kudu disebarkeun merata sabisa dina urutan primer, sarta 3′ terminal base kudu dihindari salaku T.

lampiran1:Cell LangsungRT-qPCR Komponén kitt suplement pak

1.Sél Leyuran Lysis