Kit qPCR RT Langsung sél—SYBR Héjo I Direct Lysis sél sél Siap Hiji-léngkah qRT-PCR Kit
Katerangan
Kit ieu nganggo sistem panyangga lysis unik anu tiasa gancang ngaleupaskeun RNA tina sampel sél berbudaya pikeun réaksi RT-qPCR, ku kituna ngaleungitkeun prosés purifikasi RNA anu nyéépkeun waktos sareng susah.Témplat RNA tiasa didapet dina ngan 7 menit.anu 5×Campuran RT langsung sareng 2×Réagen qPCR Campur-SYBR langsung anu disayogikeun ku kit tiasa gancang sareng efektif kéngingkeun hasil PCR kuantitatif sacara real-time.
5×Campuran RT langsung sareng 2×Langsung qPCR Campur-SYBR boga kasabaran inhibitor kuat, sarta lysate tina sampel bisa dipaké salaku template pikeun RT-qPCR langsung.Kit ieu ngandung RNA high-afinity Foregene reverse transcriptase, sareng Hot D-Taq DNA polymerase, dNTPs, MgCl2, panyangga réaksi, pangoptimal PCR sareng penstabil.
spésifikasi
200×20μl Rxns, 1000×20μl rxn
komponén Kit
| Bagian I | Panyangga CL |
| Foregene Protéase Plus II | |
| Panyangga ST | |
| Bagian II | Panghapus DNA |
| 5 × langsung RT Campur | |
| 2× Langsung qPCR Campur-SYBR | |
| 50 × ROX Rujukan Dye | |
| RNase-Gratis ddH2O | |
| parentah | |
Fitur & kauntungan
■Basajan tur éféktif: kalawan téhnologi Cell Direct RT, sampel RNA bisa diala dina ngan 7 menit.
■ Paménta sampel leutik, sahandapeun 10 sél bisa diuji.
■ throughput tinggi: eta bisa gancang ngadeteksi RNA dina sél berbudaya dina 384, 96, 24, 12, 6-sumur pelat.
■ DNA pamupus bisa gancang nyabut génom dileupaskeun, greatly ngurangan dampak dina hasil eksperimen saterusna.
■ Sistim RT na qPCR dioptimalkeun ngajadikeun dua-hambalan RT-PCR transkripsi sabalikna leuwih efisien sarta PCR leuwih spésifik, sarta leuwih tahan ka sambetan réaksi RT-qPCR.
Aplikasi kit
Lingkup aplikasi: sél berbudaya.
- RNA dileupaskeun ku lysis sampel: ngan lumaku pikeun RT-qPCR template kit ieu.
- Kit tiasa dianggo pikeun tujuan ieu: analisa éksprési gén, verifikasi pangaruh silencing gén anu dimédiasi siRNA, saringan ubar, jsb.
Diagram
Panyimpenan sarta hirup rak
Bagian I tina kit ieu kudu disimpen dina 4 ℃;Bagian II kudu disimpen dina -20 ℃.
Foregene Protease Plus II kedah disimpen dina 4℃, teu freeze dina -20 ℃.
Réagén 2×Langsung qPCR Campur-SYBR kudu disimpen dina -20℃dina poék;Upami sering dianggo, éta ogé tiasa disimpen dina 4℃ pikeun neundeun jangka pondok (make up dina 10 poé).
Prinsip desain primer PCR Waktu Nyata
Maju Primer jeung Reverse Primer
Pikeun Real Time PCR, desain primer penting pisan.Primer aya hubunganana sareng spésifisitas sareng efisiensi amplifikasi PCR, sareng tiasa dirarancang kalayan ngarujuk kana prinsip-prinsip ieu:
Panjang Primer: 18-30bp.
eusi GC: 40-60%.
Nilai Tm: Parangkat lunak desain Primer, sapertos Primer 5, tiasa masihan nilai Tm tina primer.Nilai Tm primer hulu jeung hilir kudu sacaket mungkin.Rumus itungan Tm ogé bisa dipaké: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Nalika ngalakukeun PCR, suhu sahandapeun nilai Tm primer 5 °C umumna dipilih salaku suhu annealing (kenaikan suhu annealing anu saluyu tiasa ningkatkeun spésifisitas réaksi PCR).
Primer sareng produk PCR:
Desain Primer PCR amplifikasi panjang produk preferably 100-150bp.
Primer desain di wewengkon struktural sekundér template kudu dihindari saloba mungkin.
Hindarkeun formasi 2 atawa leuwih basa pelengkap antara 3' tungtung hulu jeung hilir primers.
Primer 3' base terminal teu bisa hadir kalawan 3 tambahan berturut-turut G atawa C.
Primer sorangan henteu tiasa gaduh struktur pelengkap, upami henteu, struktur jepit rambut bakal kabentuk, mangaruhan amplifikasi PCR.
ATCG kedah disebarkeun sacara merata dina urutan primer, sareng pangkalan terminal 3′ kedah dihindari salaku T.
Appendix 1:Cell Direct RT-qPCR Kit komponén pak suplement
1.Leyuran Lysis sél
|
| |||
| komponén Kit (Sistem lisis 24 sumur / sumur) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| Bagianabdi | Panyangga CL | 20 ml | 100 ml |
| Foregene Protéase Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Panyangga ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| BagianII | Panghapus DNA | 400 μl | 1 ml × 2 |
2. RT Campur
|
| |
| komponén Kit (Sistem réaksi 20 μl) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5 × langsung RT Campur | 800 μl |
| RNase-Free ddH2O | 1,7 ml × 2 |
|
| ||
| komponén Kit (Sistem réaksi 20 μl) | DRT-01011-C1 | DRT-01011-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2× Langsung qPCR Campur-SYBR | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
| 50 × ROX Rujukan Dye | 40 ul | 200 μl |
| RNase-Free ddH2O | 1,7 ml | 10 ml |
Instruksi Manual:
