(96-sumur) QuickEasy Cell Direct RT-qPCR Kit - SYBR Green I
Katerangan
The(96-sumur) QuickEasyTM Sél langsung RT-qPCR Kit–SYBR Héjo Inyadiakeunsistem panyangga lysis unikto gancang ngaleupaskeun RNAti sél kultursampel pikeun réaksi RT-qPCR, ngaleungitkeun waktos-consuming na laboriousProsés purifikasi RNA, sarta ngan nyokot 7 menit pikeun ménta template RNA diperlukeun.The5 × langsung RT Campurjeung2× Langsung qPCR Campur-SYBRdisadiakeun dina kotak bisa gancang sartaéféktif meunangkeun real-time kuantitatifHasil PCR.
5 × langsung RT Campur jeung 2 × langsung qPCR Campur-SYBR boga kasabaran inhibitor kuat, sarta bisa ngagunakeun lysate sampel pikeun diuji salaku template pikeun transkripsi sabalikna efisien sarta Gedekeun husus.Réagen ngandung Foregene Reverse Transcriptase unik kalayan afinitas tinggi pikeun RNA, ogé Hot D-Taq DNA Polymerase, dNTPs, MgCl2 , réaksi panyangga, PCR optimizer sarta penstabil, sarta bisa dipaké ditéang jeung panyangga lysis pikeun ngadeteksi sampel gancang, gampang jeung akurat, sarta mibanda ciri sensitipitas tinggi, spésifisitas kuat sarta stabilitas alus.
kit ieu aimed di lysis mikro-sistem sél 96-well berbudaya, sarta ngabogaan uniformity alus sarta konsistensi;komponén kit nyadiakeun 96 réaksi lysis, 96 réaksi transkripsi sabalikna jeung 96 × 2 réaksi qPCR, nu bisa minuhan plat sél 96-sumur pikeun pamakéan hiji-waktos, Ngahindarkeun polusi disababkeun ku bukaan terus-terusan, katirisan jeung thawing réagen jeung degradasi kinerja réagen.
komponén Kit
| Komposisi kit ( 50 μSistim L lysis / 20 μLRT sistem réaksi / 20μSistim réaksi L qPCR) | DRT-03011 | Nyarios | |
| 96T | |||
| BagianI | panyanggaCL | 5 ml | SélLisan |
| ForegeneProtéase Plus II | 100 μL | ||
| panyanggaST | 500 μL | ||
| Bagian II | DNApamupus | 100 μL | |
| 5 × langsung RT Campur | 400 μL | RT | |
| 2× Langsung qPCR Campur-SYBR | 1 mL × 2 | qPCR | |
| 50 × ROX Rujukan Dye | 400µL | ||
| RNase- GratisddH2 O | 1,7 ml |
| |
| Mtaunan | 1 sapotong | 1 porsi | |
*: The lysis réagen DNA pamupus kaasup dina Part II kit;Komponén Lysis sél, RT, sareng qPCR tiasa dipésér nyalira.
Fitur & kauntungan
■Basajan tur éféktif: kalawan téhnologi Cell Direct RT, sampel RNA bisa diala dina ngan 7 menit.
■ Paménta sampel leutik, sahandapeun 10 sél bisa diuji.
■ throughput tinggi: eta bisa gancang ngadeteksi RNA dina sél berbudaya dina 384, 96, 24, 12, 6-sumur pelat.
■ DNA pamupus bisa gancang nyabut génom dileupaskeun, greatly ngurangan dampak dina hasil eksperimen saterusna.
■ Sistim RT na qPCR dioptimalkeun ngajadikeun dua-hambalan RT-PCR transkripsi sabalikna leuwih efisien sarta PCR leuwih spésifik, sarta leuwih tahan ka sambetan réaksi RT-qPCR.
Aplikasi kit
Lingkup aplikasi: sél berbudaya.
- RNA dileupaskeun ku lysis sampel: ngan lumaku pikeun RT-qPCR template kit ieu.
- Kit tiasa dianggo pikeun tujuan ieu: analisa éksprési gén, verifikasi pangaruh silencing gén anu dimédiasi siRNA, saringan ubar, jsb.
Panyimpenan sarta hirup rak
Bagian I kit ieu kedah disimpen dina 4℃;Bagian II kudu disimpen dina -20 ℃.
Foregene Protease Plus II kedah disimpen dina 4℃, teu freeze dina -20 ℃.
Réagén 2×Langsung qPCR Campur-Taqman kudu disimpen dina -20℃dina poék;Upami sering dianggo, éta ogé tiasa disimpen dina 4℃ pikeun neundeun jangka pondok (make up dina 10 poé).
Prinsip desain primer PCR Waktu Nyata
Maju Primer jeung Reverse Primer
Pikeun Real Time PCR, desain primer penting pisan.Primer aya hubunganana sareng spésifisitas sareng efisiensi amplifikasi PCR, sareng tiasa dirarancang kalayan ngarujuk kana prinsip-prinsip ieu:
- Panjang Primer: 18-30bp.
- eusi GC: 40-60%.
- Nilai Tm: Parangkat lunak desain Primer, sapertos Primer 5, tiasa masihan nilai Tm tina primer.Nilai Tm primer hulu jeung hilir kudu sacaket mungkin.Rumus itungan Tm ogé bisa dipaké: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Nalika ngalakukeun PCR, suhu sahandapeun nilai Tm primer 5 °C umumna dipilih salaku suhu annealing (kenaikan suhu annealing anu saluyu tiasa ningkatkeun spésifisitas réaksi PCR).
- Primer sareng produk PCR:
- Desain Primer PCR amplifikasi panjang produk preferably 100-150bp.
- Primer desain di wewengkon struktural sekundér template kudu dihindari saloba mungkin.
- Hindarkeun formasi 2 atawa leuwih basa pelengkap antara 3' tungtung hulu jeung hilir primers.
- Primer 3' base terminal teu bisa hadir kalawan 3 tambahan berturut-turut G atawa C.
- Primer sorangan henteu tiasa gaduh struktur pelengkap, upami henteu, struktur jepit rambut bakal kabentuk, mangaruhan amplifikasi PCR.
- ATCG kedah disebarkeun sacara merata dina urutan primer, sareng pangkalan terminal 3′ kedah dihindari salaku T.
lampiran1: Cell LangsungRT-qPCR Komponén kitt suplement pak
1.Sél Leyuran Lysis
| Leyuran Lysis sél | |||
| komponén Kit (Sistem lisis 24 sumur / sumur) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| Bagianabdi | Panyangga CL | 20 ml | 100 ml |
| Foregene Protéase Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Panyangga ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| BagianII | Panghapus DNA | 400 μl | 1 ml × 2 |
| RT Campur | |
| komponén Kit (Sistem réaksi 20 μl) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5 × langsung RT Campur | 800 μl |
| RNase-Free ddH2O | 1,7 ml × 2 |
| qPCR Campur | ||
| komponén Kit (Sistem réaksi 20 μl) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2× Langsung qPCR Campur-Taqman | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
| 20 × ROX Rujukan Dye | 40 ul | 200 μl |
| RNase-Free ddH2O | 1,7 ml | 10 ml |
Instruksi Manual:
