Sél Direct RT qPCR Kit—Taqman Direct Cell Lysis Cell Ready One-Step qRT-PCR Kits Probe
Katerangan
Produk ieu ngagunakeun sistem panyangga lysis unik pikeun gancang ngaleupaskeun RNA tina sampel sél berbudaya pikeun réaksi RT-qPCR, ngaleungitkeun prosés purifikasi RNA waktu-consuming tur laborious, sarta ngan 7 menit pikeun ménta template RNA diperlukeun, kalawan 5 × Direct RT Campuran, 2 × Direct qPCR Campur-Taqman disadiakeun ku kit nu bisa gancang jeung éfisién hasil kuantitatif real-time PCR kuantitatif.
5 × langsung RT Campur jeung 2 × langsung qPCR Campur-Taqman boga kasabaran inhibitor kuat tur bisa ngalakukeun ngabalikeun efisien sarta Gedekeun husus ngagunakeun lysate sampel pikeun diukur salaku citakan.Reagen ngandung Foregene Reverse Transcriptase, Hot D-Taq DNA Polymerase, dNTPs, MgCl2, Réaksi panyangga, PCR Optimizer na Stabilizer, nu bisa dipaké kalawan lysis panyangga pikeun gancang sarta gampang ngadeteksi sampel, sarta boga ciri sensitipitas tinggi, spésifisitas jeung stabilitas.
spésifikasi
200×20μl Rxns, 1000×20μl rxn
komponén Kit
| QuickEasyTMSél langsung RT-qPCR Kit-Taqman | ||||
| komponén Kit 20μl Sistim Réaksi qPCR | DRT-01021 | DRT-01022 | Catetan | |
| 200 T | 1000 T | |||
|
Bagian I | Panyangga CL | 4 ml | 20 ml | Lisis sél |
| Foregene Protéase Plus II | 80 ul | 400 μl | ||
| Panyangga ST | 400 μl | 1 ml × 2 | ||
|
Bagian II | Panghapus DNA | 80 ul | 400 μl | |
| 5×Langsung RT Campuran * | 160 μl | 800 μl | RT | |
| 2× Langsung qPCR Campur-Taqman * | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 | qPCR | |
| 20 × ROX Rujukan Dye | 40 ul | 200 μl | ||
| RNase-Free ddH2O | 1,7 ml | 10 ml | ||
| Instruksi Manual | 1 sapotong | 1 sapotong | ||
*:Cell Lysis, 5 × Direct RT Mix, 2 × Direct qPCR Mix-Taqman tiasa dipésér nyalira
Fitur & kauntungan
■Basajan tur éféktif: kalawan téhnologi Cell Direct RT, sampel RNA bisa diala dina ngan 7 menit.
■ Paménta sampel leutik, sahandapeun 10 sél bisa diuji.
■ throughput tinggi: eta bisa gancang ngadeteksi RNA dina sél berbudaya dina 384, 96, 24, 12, 6-sumur pelat.
■ DNA pamupus bisa gancang nyabut génom dileupaskeun, greatly ngurangan dampak dina hasil eksperimen saterusna.
■ Sistim RT na qPCR dioptimalkeun ngajadikeun dua-hambalan RT-PCR transkripsi sabalikna leuwih efisien sarta PCR leuwih spésifik, sarta leuwih tahan ka sambetan réaksi RT-qPCR.
Aplikasi kit
Lingkup aplikasi: sél berbudaya.
- RNA dileupaskeun ku lysis sampel: ngan lumaku pikeun RT-qPCR template kit ieu.
- Kit tiasa dianggo pikeun tujuan ieu: analisa éksprési gén, verifikasi pangaruh silencing gén anu dimédiasi siRNA, saringan ubar, jsb.
Panyimpenan sarta hirup rak
Bagian I kit ieu kedah disimpen dina 4℃;Bagian II kudu disimpen dina -20 ℃.
Foregene Protease Plus II kedah disimpen dina 4℃, teu freeze dina -20 ℃.
Réagén 2×Langsung qPCR Campur-Taqman kudu disimpen dina -20℃dina poék;Upami sering dianggo, éta ogé tiasa disimpen dina 4℃ pikeun neundeun jangka pondok (make up dina 10 poé).
Prinsip desain primer PCR Waktu Nyata
Maju Primer jeung Reverse Primer
Pikeun Real Time PCR, desain primer penting pisan.Primer aya hubunganana sareng spésifisitas sareng efisiensi amplifikasi PCR, sareng tiasa dirarancang kalayan ngarujuk kana prinsip-prinsip ieu:
- Panjang Primer: 18-30bp.
- eusi GC: 40-60%.
- Nilai Tm: Parangkat lunak desain Primer, sapertos Primer 5, tiasa masihan nilai Tm tina primer.Nilai Tm primer hulu jeung hilir kudu sacaket mungkin.Rumus itungan Tm ogé bisa dipaké: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Nalika ngalakukeun PCR, suhu sahandapeun nilai Tm primer 5 °C umumna dipilih salaku suhu annealing (kenaikan suhu annealing anu saluyu tiasa ningkatkeun spésifisitas réaksi PCR).
- Primer sareng produk PCR:
- Desain Primer PCR amplifikasi panjang produk preferably 100-150bp.
- Primer desain di wewengkon struktural sekundér template kudu dihindari saloba mungkin.
- Hindarkeun formasi 2 atawa leuwih basa pelengkap antara 3' tungtung hulu jeung hilir primers.
- Primer 3' base terminal teu bisa hadir kalawan 3 tambahan berturut-turut G atawa C.
- Primer sorangan henteu tiasa gaduh struktur pelengkap, upami henteu, struktur jepit rambut bakal kabentuk, mangaruhan amplifikasi PCR.
- ATCG kedah disebarkeun sacara merata dina urutan primer, sareng pangkalan terminal 3′ kedah dihindari salaku T.
lampiran1: Cell LangsungRT-qPCR Komponén kitt suplement pak
1.Sél Leyuran Lysis
| Leyuran Lysis sél | |||
| komponén Kit (Sistem lisis 24 sumur / sumur) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| Bagianabdi | Panyangga CL | 20 ml | 100 ml |
| Foregene Protéase Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Panyangga ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| BagianII | Panghapus DNA | 400 μl | 1 ml × 2 |
| RT Campur | |
| komponén Kit (Sistem réaksi 20 μl) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5 × langsung RT Campur | 800 μl |
| RNase-Free ddH2O | 1,7 ml × 2 |
| qPCR Campur | ||
| komponén Kit (Sistem réaksi 20 μl) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2× Langsung qPCR Campur-Taqman | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
| 20 × ROX Rujukan Dye | 40 ul | 200 μl |
| RNase-Free ddH2O | 1,7 ml | 10 ml |
Instruksi Manual:
