Foreasy HS Taq DNA Polimérase
Katerangan Kit:
◮Spésifisitas tinggi: Énzim nu mibanda aktivitas panas-mimiti tinggi.
◮Amplifikasi Gancang: 10 detik/kb.
◮adaptability template tinggi: bisa dipaké pikeun éfisién amplify HighGCnilaijeungrupa-rupa template DNA hese-amplify.
◮Kasatiaan kuat: Kasatiaan nyaéta 6 kaliof biasa Taq Enzim.
Katerangan
Foreasy HS Taq DNA Polymerase mangrupikeun énzim Taq énggal anu dikedalkeun dina baktéri rékayasa Escherichia coli ku téknologi rekombinasi gen.Saatos énzim dirawat ku prosés khusus, éta'aktivitas s dipeungpeuk saméméh aktivasina termal, kukituna ngahambat amplifikasi non-spésifik disababkeun ku annealing non-spésifik primers atawa dimer primer dina kaayaan suhu low.Produk ieu cocog pikeun PCR React anu khusus pisanion, M ultiple x PCR , eusi GC tinggi (> 60%),kalawanstruktur sekundératawa liannagénom tukang kuaticsamplifikasi jeung génom skala badagicsdeteksi amplifikasi.Énzim mibanda 5' → 3' aktivitas DNA polimérase jeung 5' → 3' aktivitas exonuclease, tapi euweuh aktivitas 3' → 5' exonuclease.
komponén Kit
| Komponén | IM-01021 | IM-01022 | IM-01023 |
| Foreasy HS Taq DNA Polimérase (5 U/μL) | 5000 U (1 ml) | 50 KU (10 mL) | 500 KU (100 mL) |
| 2 × Taq Réaksi panyangga | 25ml × 5 | 250 ml × 5 | 500 ml × 25 |
Fitur & kauntungan
- Spésifisitas tinggi: Énzim kalayan aktivitas panas-mimiti tinggi.
- amplifikasi Gancang: 10 detik/kb.
- adaptability template High: bisa dipaké pikeun éfisién ngagedékeun HighGCnilaijeungrupa-rupa template DNA hese-amplify.
- Kasatiaan kuat: Kasatiaan nyaéta 6 kaliof biasa Taq Enzim.
Aplikasi kit
- Rupa-rupa PCR / Sistim qPCR sarta sistem PCR langsung
- Fragmen DNA diamplifikasi PCR
- tanda DNA
- Urutan DNA
- PCR tambah buntut A
Harti Kagiatan
1U: Jumlah énzim diperlukeun pikeun ngasupkeun 10 nmol tinaDNAkana zat asam-leyur ngagunakeun DNA spérma salmon diaktipkeun salaku citakan / primer, 74 °C, 30 menit.
Kaayaan Réaksi
| Suhu | Waktu Réaksi | waktos siklus |
| 37°C | 5 mnt | 1 |
| 94°C | 5 mnt | 1 |
| 94°C | 10 detik | 40 |
| 60°C | 10 detik |
Catetan:Pikeun sistem 10 µL sareng 20 µL, tambahkeun volume minyak mineral anu sami upami siklus termal henteu ngagaduhan tutup panas.
Kaayaan réaksi PCR rupa-rupa gumantung kana kaayaan struktur template, primer, jeung sajabana.Dina operasi husus, perlu mendesain kaayaan réaksi optimal, kaasup suhu annealing, waktos extension, jeung sajabana, nurutkeun kaayaan spésifik kayaning tipe template, ukuran tina sempalan target, runtuyan dasar tina sempalan amplified, sarta eusi GC jeung panjang Primer.
Panyimpenan
-20 ± 5 °C salila 2 taun atawa -80 °C pikeun neundeun jangka panjang.
Taya sinyal amplifikasi
1.The Taq DNA Polimérase dina kit leungiteun aktivitas na alatan neundeun bener atawa béakna kit.
Rekomendasi: Pastikeun kaayaan neundeun kit;tambahkeun deui jumlah luyu Taq DNA Polymerase kana sistem PCR atawa meuli Real Time PCR Kit anyar pikeun percobaan patali.
2. Aya loba sambetan Taq DNA Polimérase dina template DNA.
Saran: Repurify template atawa ngurangan jumlah template dipaké.
3.Konsentrasi Mg2+ teu cocog.
Rekomendasi: Konsentrasi Mg2+ tina 2 × Campuran PCR Nyata anu kami nyayogikeun nyaéta 3.5mM.Nanging, pikeun sababaraha primer sareng citakan khusus, konsentrasi Mg2+ tiasa langkung luhur.Ku alatan éta, Anjeun bisa langsung nambahkeun MgCl2 pikeun ngaoptimalkeun konsentrasi Mg2+.Disarankeun pikeun ngaronjatkeun Mg2 + 0.5mM unggal waktu pikeun optimasi.
4.The PCR kaayaan amplifikasi teu cocog, sarta urutan Primer atawa konsentrasi teu bener.
Saran: mastikeun kabeneran urutan primer sareng primer henteu didegradasi;lamun sinyal amplifikasi teu alus, coba nurunkeun suhu annealing tur saluyukeun konsentrasi Primer appropriately.
5.Jumlah template teuing saeutik atawa teuing.
Rekomendasi: Laksanakeun éncér gradién linierisasi template, sareng pilih konsentrasi citakan kalayan pangaruh PCR pangsaéna pikeun percobaan PCR Real Time.
NTC boga nilai fluoresensi teuing tinggi
1.Reagent kontaminasi disababkeun salila operasi.
Rekomendasi: Ganti ku réagen anyar pikeun percobaan PCR Real Time.
2.Kontaminasi lumangsung salila persiapan sistem réaksi PCR.
Rekomendasi: Candak ukuran pelindung anu diperyogikeun salami operasi, sapertos: ngagem sarung tangan lateks, nganggo tip pipette sareng saringan, jsb.
Primer 3.The didegradasi, sarta degradasi tina primers bakal ngabalukarkeun Gedekeun non-spésifik.
Saran: Paké SDS-PAGE éléktroforésis pikeun ngadeteksi naha primers anu didegradasi, sarta ngaganti eta kalawan primers anyar pikeun percobaan Real Time PCR.
Primer dimer atanapi amplifikasi non-spésifik
1.Konsentrasi Mg2+ teu cocog.
Rekomendasi: Konsentrasi Mg2 + tina 2 × Real PCR EasyTM Campuran kami nyayogikeun nyaéta 3,5 mM.Nanging, pikeun sababaraha primer sareng citakan khusus, konsentrasi Mg2+ tiasa langkung luhur.Ku alatan éta, Anjeun bisa langsung nambahkeun MgCl2 pikeun ngaoptimalkeun konsentrasi Mg2+.Disarankeun pikeun ngaronjatkeun Mg2 + 0.5mM unggal waktu pikeun optimasi.
2.The PCR annealing hawa teuing low.
Saran: Ningkatkeun suhu annealing PCR ku 1 ℃ atanapi 2 ℃ unggal waktos.
3.Produk PCR panjang teuing.
Rekomendasi: Panjang produk PCR Real Time kedah antara 100-150bp, teu langkung ti 500bp.
Primer 4.The didegradasi, sarta degradasi tina primers bakal ngakibatkeun penampilan Gedekeun husus.
Saran: Paké SDS-PAGE éléktroforésis pikeun ngadeteksi naha primers anu didegradasi, sarta ngaganti eta kalawan primers anyar pikeun percobaan Real Time PCR.
5.Sistim PCR teu bener, atawa sistem teuing leutik.
Saran: Sistem réaksi PCR leutik teuing bakal nyababkeun akurasi deteksi turun.Hadé pisan mun éta ngagunakeun sistem réaksi dianjurkeun ku alat PCR kuantitatif pikeun ngajalankeun deui percobaan Real Time PCR.
Kaulangan goréng tina nilai kuantitatif
1.Instrumén téh malfunctioning.
Saran: Bisa jadi aya kasalahan antara unggal liang PCR alat, hasilna reproducibility goréng salila manajemén suhu atawa deteksi.Mangga parios nurutkeun parentah alat nu pakait.
2.The purity sampel teu alus.
Rekomendasi: Sampel anu teu murni bakal nyababkeun réproduktifitas ékspérimén anu goréng, anu kalebet kamurnian citakan sareng primer.Hadé pisan mun éta repurify template, sarta primers anu pangalusna dimurnikeun ku SDS-kaca.
3.The préparasi sistem PCR jeung waktu neundeun panjang teuing.
Saran: Anggo sistem Real Time PCR pikeun percobaan PCR langsung saatos persiapan, sareng ulah ngantepkeunana kanggo lami teuing.
4.The PCR kaayaan amplifikasi teu cocog, sarta urutan Primer atawa konsentrasi teu bener.
Saran: mastikeun kabeneran urutan primer sareng primer henteu didegradasi;lamun sinyal amplifikasi teu alus, coba nurunkeun suhu annealing tur saluyukeun konsentrasi Primer appropriately.
5.Sistim PCR teu bener, atawa sistem teuing leutik.
Saran: Sistem réaksi PCR leutik teuing bakal nyababkeun akurasi deteksi turun.Hadé pisan mun éta ngagunakeun sistem réaksi dianjurkeun ku alat PCR kuantitatif pikeun ngajalankeun deui percobaan Real Time PCR.
