Escherichia coli O157: Kit Detéksi Asam Nukléat H7 (Metode Probe Fluoresensi PCR)
Katerangan Kit:
Ucing No.FP102
Hal ieu dipaké pikeun deteksi gancang sarta screening of E. coli O157: H7 dina dahareun, feed, sampel cai jeung sampel lingkungan.
Katerangan
Hal ieu dipaké pikeun deteksi gancang sarta screening E. coli O157:H7 dina dahareun, feed, sampel cai jeung sampel lingkungan.
[Prinsip tés]Nurutkeun prinsip téhnologi PCR fluoresensi, primers husus sarta panyilidikan Taqman dirancang pikeun gén spésifik Escherichia coli O157: H7, sarta dideteksi ku alat PCR fluoresensi, ku kituna pikeun ngawujudkeun deteksi Escherichia coli O157: H7 deteksi kualitatif DNA.
Eusi Kit
Catetan: ROX channel usik teu kaasup.
| Componén | Spésifikasi | Qkeutuhan |
| Panyangga A | tabung | 1 |
| Panyangga B | tabung | 1 |
| kontrol positif | tabung | 1 |
| kontrol négatip | tabung | 1 |
Diarepkeun Dianggo
Hal ieu dipaké pikeun deteksi gancang sarta screening E. coli O157:H7 dina dahareun, feed, sampel cai jeung sampel lingkungan.
Kaayaan Panyimpenan Sareng Tanggal Kadaluwarsa
Nyimpen dina -20 ℃ di nu poek jeung ulah terus-terusan katirisan jeung thawing.
Mangsa validitas nyaéta 12bulan, sarta tanggal produksi ditémbongkeun dina bungkusan luar.
Instrumén Jeung Consumables
Alat PCR kuantitatif fluoresensi, gun pipette sareng tip anu cocog, shaker vortex, centrifuge mini.
Pamakéan
1. Ngolah Sampel
1.1 Jenis Sampel: Kit ieu cocog pikeun kadaharan, pakan, sampel cai jeung sampel séjén anu disangka kacemar ku Escherichia coli O157:H7.Pikeun produk daging olahan jero, inuman sareng zat séjén anu ngandung pigmén, aranjeunna kedah dikumbah supados henteu mangaruhan pangumpulan sinyal fluoresensi.
1.2 Ngolah sampel: Tingal "GB 4789.10-2016 Kasalametan Pangan Standar Nasional Ujian Mikrobiologis Pangan Escherichia coli O157: Uji H7" kanggo persiapan sampel, budaya pengayaan sareng isolasi Escherichia coli O157: H7.
- Nékstraksi asam ukleat
Candak 20 ml larutan pengayaan dina tabung centrifuge 1,5 ml, tambahkeun 200 μL lisat mikroba (peryogi kit tambahan), vortex salami 30 detik, centrifuge sakedap, teras sisihkan.
Catetan: Ékstraksi asam nukléat tina lysate kudu réngsé dina 10 menit, sarta teu bisa disimpen keur lila.
3. Amplifikasi Asam Nukléat
3.1 Hurungkeun alat PCR kuantitatif fluoresensi pikeun dianggo.
Panyangga A jeung panyangga B ti kit , ngalembereh aranjeunna tuntas, sarta centrifuge sakeudeung.Tambahkeun 18 μL Buffer A jeung 2 μL Buffer B ka unggal tube réaksi PCR.Teras tambahkeun 5 ml masing-masing kontrol négatip, asam nukléat sasari, sareng kontrol positif kana tabung réaksi PCR, tutup tabung, sareng centrifuge sakedap.
3.3 Mindahkeun tabung réaksi PCR kana mesin PCR fluoresensi, sarta ngagunakeun prosedur di handap pikeun ngalakukeun percobaan amplifikasi: pilih 25 ml pikeun sistem réaksi, kumpulkeun sinyal fluoresensi dina 60 ° C pikeun tiap siklus, tur pilih FAM pikeun saluran deteksi.
| Lengkah | Program | Jumlah siklus |
| 1 | 37 ℃ 5 mnt | 1 |
| 2 | 9 5 ℃ 3 mnt | 1 |
| 3 | 95 ° C 15 detik | 40 |
| 60 ℃ 30s (ngumpulkeun fluoresensi) |
Pituduh pikeun analisis masalah
The following is an analysis of the problems that might be encountered in the extraction of viral RNA. We wish it would be helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems other than operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. Contact us if you need at : 028-83361257or E-mail：Tech@foregene.com。
Henteu aya RNA anu tiasa diekstrak atanapi ngahasilkeun asam nukléat rendah
Biasana aya seueur faktor anu mangaruhan efisiensi pamulihan, sapertos: eusi sampel RNA, metode operasi, volume élusi, jsb.
Analisis sabab umum:
1.És mandi atawa-suhu low (4 ° C) centrifugation salila operasi.
Saran: Operasi suhu kamar (15-25 ° C), henteu pernah mandi és sareng centrifuge suhu rendah.
2. Panyimpenan sampel anu teu leres atanapi panyimpen sampel pikeun panjang teuing.
Saran: Simpen conto dina -80 ° C atanapi beku dina nitrogén cair, sareng ulah aya pamakean freeze-thaw;coba ngagunakeun sampel anyar dikumpulkeun pikeun ékstraksi RNA.
3.Lisis sampel teu cukup
Rekomendasi: Punten pastikeun yén sampel sareng solusi anu tiasa dianggo (Linear Acrylamide) parantos dicampur tuntas sareng diinkubasi salami 10 mnt dina suhu kamar (15-25 ° C)
4.Eluent ieu ditambahkeun salah
Rekomendasi: Pastikeun yén RNase-Free ddH2O ditambahkeun kana tengah mémbran kolom purifikasi.
5.Volume Improper étanol anhidrat dina panyangga viRW2
Saran: Punten turutan petunjukna, tambahkeun volume étanol anhidrat anu leres kana Buffer viRW2 sareng campur ogé sateuacan nganggo kit.
6.Improper pamakéan sampel.
Saran: 200µl sampel per 500µl Buffer viRL.Volume sampel kaleuleuwihan bakal ngakibatkeun ngurangan laju ékstraksi RNA.
7. Volume élusi teu bener atawa élusi teu lengkep.
Saran: Volume eluent kolom purifikasi nyaéta 30-50μl;Upami pangaruh élusi henteu nyugemakeun, disarankeun pikeun nambihan ddH Bebas RNase anu dipanaskeun.2O sareng manjangkeun waktos nempatkeun dina suhu kamar, sapertos 5-10min
8.Kolom purification boga résidu étanol sanggeus rinsing di panyangga viRW2.
Saran: Upami étanol masih tetep saatos dikumbah dina Buffer viRW2 sareng séntrifugasi tabung-kosong salami 2 menit, kolom purifikasi tiasa ditinggalkeun dina suhu kamar salami 5 menit saatos séntrifugasi tabung-kosong pikeun ngaleungitkeun sésa-sésa étanol.
Degradasi molekul RNA dimurnikeun
Kualitas RNA anu dimurnikeun aya hubunganana sareng faktor sapertos panyimpenan sampel, kontaminasi RNase, sareng operasi.
Analisis sabab umum:
1.The sampel dikumpulkeun teu disimpen dina jangka waktu.
Saran: Lamun sampel teu dipaké dina waktu sanggeus ngumpulkeun, mangga nyimpen eta dina -80 ℃ atawa nitrogén cair langsung.Pikeun ékstraksi molekul RNA, coba ngagunakeun sampel anyar dikumpulkeun sabisana.
2.Collected sampel anu katirisan sarta thawing sababaraha kali.
Saran: Hindarkeun katirisan sareng pencairan (henteu langkung ti sakali) salami ngumpulkeun sareng neundeun sampel, upami henteu ngahasilkeun asam nukléat bakal turun.
3. RNase diwanohkeun di kamar operasi atawa euweuh sarung disposable, masker, jsb anu dipaké.
Saran: Ékstraksi molekul RNA ékspérimén pangalusna dipigawé di kamar operasi RNA misah, sarta tabel ékspérimén cleaned saméméh percobaan.Anggo sarung tangan sareng masker anu tiasa dianggo salami ékspérimén pikeun nyegah degradasi RNA disababkeun ku bubuka RNase.
4.The réagen kacemar ku RNase salila pamakéan.
Saran: Ganti ku Kit Isolasi RNA Viral anyar pikeun percobaan anu aya hubunganana.
5.The kontaminasi RNase tina tabung centrifuge, tips pipette, jsb Saran: Pastikeun yén tabung centrifuge, tips pipette, sarta pipettes sadayana RNase-Free.
Molekul RNA dimurnikeun mangaruhan percobaan hilir
Molekul RNA dimurnikeun ku kolom purifikasi bakal mangaruhan percobaan hilir lamun aya teuing ion uyah atawa protéin, kayaning: reverse transcription, Northern Blot, jsb.
1. Aya sésana ion uyah dina molekul RNA eluted.
Rekomendasi: Pastikeun yén volume anu bener tina étanol anhidrat geus ditambahkeun kana panyangga viRW2, sarta ngumbah kolom purifikasi dua kali nurutkeun laju centrifugation bener dina parentah operasi; Lamun masih aya ion uyah sésana, Anjeun bisa nambah panyangga viRW2 kana kolom purifikasi, sarta ninggalkeun dina suhu kamar salila 5 menit.Lajeng ngalakukeun centrifugation pikeun miceun kontaminasi ion uyah ka extent greatest
2. Aya sésa étanol dina molekul RNA élusi
Saran: sakali confirming yén kolom purifikasi geus rinsed ku panyangga viRW2, ngalakukeun centrifugation tabung-kosong nurutkeun speed centrifugal on parentah operasi.Lamun masih aya étanol sésana, éta bisa ditinggalkeun pikeun 5 menit dina suhu kamar sanggeus hiji centrifugation tabung-kosong pikeun miceun étanol sésana ka extent greatest.
Instruksi Manual:
Viral RNA Isolasi Kit Instruksi Manual
